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目的：通过体外实验探讨肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)诱导鼠肺成纤维细胞增殖的信号转导机制,为设计治疗尘肺新药提供参科学的参考依据。方法：对SD大乳鼠肺成纤维细胞进行原代培养和传代培养,传至4-5代后,用无血清Eagles液调整细胞浓度为1×105/ml,进行纯化培养和刺激培养。实验分为6组：空白对照组：加入无血清Eagles液；TNF-α组：含20ng/mlTNF-α的无血清的Eagles液；FSK组：含10-6mol/LFSK的无血清的Eagles液；20ng/mlTNF-α+10-7mol/LFSK组；20ng/ml TNF-α+10-6mol/LFSK组；20ng/ml TNF-α+10-5mol/LFSK组,每组设4瓶平行样品。置37℃、5％CO2恒温培养箱内刺激培养4h和24h。用氯氨T法检测鼠肺成纤维细胞中羟脯氨酸的含量；用Western blot技术检测鼠肺成纤维细胞Gq蛋白的表达；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鼠肺成纤维细胞内环-磷酸腺苷(cAMP)的含量；用荧光细胞免疫组化技术测定鼠肺成纤维细胞内磷脂酶C(PLC)和蛋白激酶C(PKC)的表达。结果：1.羟脯氨酸含量结果显示：在同一时间点,单独TNF-α和TNF-α联合FSK组羟脯氨酸含量较空白对照组高：TNF-α联合FSK组的羟脯氨酸含量较单独TNF-α组低,且随着FSK浓度的增高,各实验组羟脯氨酸含量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组随着作用时间的延长,羟脯氨酸含量显著升高(P<0.05)。2.cAMP含量结果显示：在同一时间点,各实验组cAMP表达量较空白对照组显著增高；TNF-α+10-5mol/LFSK组cAMP表达量较其它实验组高；单独TNF-α组的cAMP表达含量较单独FSK组和TNF-α+10-6mol/LFSK组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。在4h时间点,TNF-α+10-7mol/LFSK组的cAMP表达量较单独FSK和TNF-α+10-6mol/LFSK组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。3.Gq蛋白Western blot结果显示：在同一时间点,单独TNF-α组,TNF-α联合不同浓度FSK组的Gq蛋白表达量较空白对照组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。TNF-α联合不同浓度FSK组与TNF-α组Gq蛋白表达量两两比较,其差异不具有统计学意义(P>0.05)不同时间点间结果比较显示：20ng/ml TNF-a和20ng/ml TNF-a联合不同浓度FSK组的Gq蛋白表达量较4h时间点低,差别具有统计学意义(P<0.05)。4.PLC结果显示：在4h时间点,所有实验组的PLC平均光密度值较空白对照组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。在24h时间点,单独TNF-α组和TNF-α+10-7mol/LFSK组PLC平均光密度值较空白对照组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。在同一时间点,TNF-α联合10-6mol/L和10-5mol/LFSK组PLC平均光密度值较单独TNF-α组低,差别具有统计学意义(P<0.05),且随着FSK浓度的增高和作用时间的延长PLC平均光密度值逐渐降低,差别具有统计学意义(P<0.05)。5.PKC结果显示：在同一时间点,单独FSK组,单独TNF-α组,TNF-α联合10-7mol/L和10-6mol/LFSK组的PLC平均光密度值较空白对照组高；TNF-a联合10-6mol/L和10-5mol/LFSK组的PKC平均光密度值较单独TNF-α组低差别具有统计学意义(P<0.05)；并且伴随FSK浓度的增高,逐渐降低,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论：1、TNF-α可能通过活化Gq-PLC-PKC途径促进鼠肺成纤维细胞的增殖。2、TNF-α可以上调鼠肺成纤维细胞Gq蛋白水平,提高cAMP水平对这种上调作用影响不明显。3、FSK对TNF-α引起的鼠肺成纤维细胞增殖有一定的抑制作用,并且这种抑制作用呈现一定剂量依赖关系。4、在TNF-α作用鼠肺成纤维细胞时,上调cAMP水平可能会干扰Gq-PLC-PKC通路下游信号分子PLC、PKC而影响鼠肺成纤维细胞的增殖。