【摘 要】
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目的:研究肝祖细胞内TGF-β/Smad信号通路与EGFR/AKT信号通路在上皮间质化中的相互作用。方法:用TGF-β1刺激肝脏祖细胞3天,用荧光检测细胞形态学改变,用蛋白免疫印迹检测受
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目的:研究肝祖细胞内TGF-β/Smad信号通路与EGFR/AKT信号通路在上皮间质化中的相互作用。方法:用TGF-β1刺激肝脏祖细胞3天,用荧光检测细胞形态学改变,用蛋白免疫印迹检测受处理的肝脏祖细胞的上皮标记物和间质标记物。验证肝祖细胞在TGF-β1刺激下是否发生EMT。用WESTERNBLOTTING检测TGF-β/Smad信号通路的激活状态。检测具有双向作用的Smad3蛋白激活状态。探究肝脏祖细胞内TGF-β1如何激活Smad3的LINKER端磷酸化位点。检测TGF-β1刺激下肝脏祖细胞内EGFR的激活状态。利用EGFR特异性受体抑制剂AG,检测EGFR是否能被TGF-β1激活,进而激活AKT蛋白。利用PI3K特异性抑制剂验证EGFR/AKT是否参与了Smad3LINKER端磷酸化位点的激活。检验在AKT蛋白被抑制激活后,TGF-β1是否能诱导肝脏祖细胞的EMT发生。结论:TGF-β1并不能明显诱导肝脏祖细胞的EMT发生。肝脏祖细胞中,TGF-β1通过EGFR/AKT信号转导突进与TGF-β/Smad信号转导途径相互拮抗,从而导致TGF-β1不能明显诱导肝脏祖细胞发生EMT。在经典TGF-β/Smad信号通路里,TGF-β激活Smad3蛋白的C端磷酸化位点来促进EMT过程的发生。但在肝脏祖细胞内,TGF-β通过活化EGFR/AKT信号通路,磷酸化的AKT蛋白激活Smad3蛋白LINKER端,从而拮抗Smad3C端磷酸化激活的作用,导致TGF-β1诱导EMT发生的作用不明显。这一机制的发现进一步加深对肝脏纤维化肿瘤发生发展的机制的认识,有利于相应靶向药物的开发。
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