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目的:1.研究p53基因缺失骨髓瘤细胞侵袭性变化。2.探讨p53基因缺失影响骨髓瘤细胞侵袭性变化机制。方法:1.采用细胞转染的方法敲降及过表达骨髓瘤细胞(NCI-H929及U266)中p53基因。2.在基因及蛋白水平验证转染效力即p53基因是否成功敲降及过表达。3.Transwell方法检测敲降或过表达p53基因的骨髓瘤细胞侵袭性变化。4.Calcein-AM试剂盒检测转染后的骨髓瘤细胞黏附能力变化。5.Western blot及QT-PCR方法验证转染后的骨髓瘤细胞EMT样改变。6.Western blot及QT-PCR方法检验转染后的骨髓瘤细胞中CXCR5/CXCR4表达情况。7.Western blot及Transwell方法验证转染后的骨髓瘤细胞是否影响CXCL13趋化因子趋化性。8.QT-PCR方法检测miR19a在转染后的骨髓瘤细胞中的表达情况。9.Western blot及QT-PCR方法检测miR19a与CXCR5之间关系。10.Western blot、QT-PCR及Transwell方法检测p53、CXCR5、miR19a之间相互关系。结果:1.骨髓瘤细胞NCI-H929经p53 siRNA转染可使p53在mRNA水平及蛋白水平的表达均降低,经Nutlin-3处理后p53在mRNA水平及蛋白水平表达均升高,而骨髓瘤细胞U266经p53 siRNA转染及Nutlin-3处理后p53表达未见明显变化。2.siRNA敲降p53基因使骨髓瘤细胞NCI-H929侵袭性明显增加,而骨髓瘤细胞U266侵袭性未见明显变化;同时Nutlin-3上调p53基因使NCI-H929细胞侵袭性明显降低,而U266细胞侵袭性未见明显变化。3.经p53 siRNA转染的骨髓瘤细胞NCI-H929的黏附能力下降而U266细胞黏附能力未见明显变化。4.p53 siRNA转染后的骨髓瘤细胞NCI-H929中上皮标志物E-cadherin表达降低,而间质标志物Vimentin,Snail,Twist等表达上调,U266细胞中此种变化不明显。5.经p53 siRNA转染的骨髓瘤细胞NCI-H929中CXCR5在基因水平及蛋白水平表达均升高,而CXCR4表达未见明显变化。6.敲降p53基因增强了CXCL13依赖的NCI-H929细胞的侵袭性7.p53 siRNA转染的骨髓瘤细胞NCI-H929中miR19a的表达上调,而经Nutlin-3处理的NCI-H929细胞中miR19a表达减低;骨髓瘤细胞U266中此种变化不明显。8.过表达miR19a可在mRNA和蛋白质水平上调CXCR5的表达并增强NCI-H929细胞的侵袭性;反之,抑制miR-19a的表达可在mRNA和蛋白质水平下调CXCR5的表达以及减弱NCI-H929细胞的侵袭性。9.沉默miR19a可特异性地消除p53调节CXCR5的能力及对骨髓瘤NCI-H929侵袭性调节,表明在NCI-H929细胞中p53调节CXCR5是由miR19a介导的。结论:在MM患者中一旦p53基因缺失/失活将导致抑癌作用减弱,致癌作用加强,从而减弱肿瘤细胞与周围细胞的黏附能力,使得肿瘤迁移能力增强,并通过增加miR19a的分泌激活CXCR5-CXCL13轴使得肿瘤细胞侵袭性增强。