背景 我国重型肝炎或急性肝功能衰竭发生率较高,其病理特点是大块或亚大块肝细胞坏死,而残存肝细胞的增殖受到多种因素的抑制,因此依赖病变肝脏自身的能力引发肝再生困难。 原位肝移植(OLT)是迄今为止治疗终末期肝病的有效的方法,但因供肝不足、费用昂贵且需终身使用免疫抑制剂等诸多因素限制了其临床应用。 肝细胞移植作为辅助治疗方法是肝脏移植的重要补充,但肝细胞的来源、数量、移植后肝细胞在体内的增殖和功能等问题尚未完全解决,阻碍着它的发展,理论上用正常人肝细胞作为细胞移植来源最为理想,但同样存在供体短缺的问题,且增殖能力较差;异种肝细胞虽然来源广泛,但又存在免疫排斥、病毒感染特别是逆转录病毒感染等问题;肝肿瘤细胞株增殖能力强,但存在肿瘤种植风险,且肝细胞功能较差;永生化细胞系应用最多的是SV40 LT基因转染的永生化肝细胞,虽解决了增殖难题,但安全性受到置疑。 人胎肝细胞可分泌细胞生长因子刺激离体细胞生长增殖,组织分化增殖能力强,且免疫原性弱,为较好的细胞来源;临床资料证实胎儿肝细胞移植在治疗肝功能衰竭、先天性酶缺乏等疾病方面有一定的价值,但同样存在供体缺乏及移植细胞增殖困难等问题。而肝干细胞可以解决这些问题,是因为它具有强大的增殖能力和双向分化潜能,移植时仅需成熟肝细胞数量的1/3～1/5,并且胎肝干细胞体积小,更易于从门静脉注射,移植后易于融入肝板,还有易于大量分离培养和基因操作等优点。研究表明处于生长静止期的成人肝脏中干细胞数量有限,而胎肝中富含大量肝干细胞,如果选取人胎儿肝干细胞作为细胞移植来源,就可避免未知病原体感染和异种基因导入人体,因此,体外成功分离纯化人胎儿肝干细胞,并对其进行培养扩增无疑具有非常重要的意义。 本实验对人胎儿肝干细胞体外分离培养扩增做了初步探索,旨在寻找对其进