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目的通过观察不同频率电针对慢性脑血流低灌注(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)模型大鼠局部脑血流(regional cerebral blood flow,rCBF)和行为学的影响及脑内ROS、SOD、HIF-1α、ACh的表达,比较不同频率电针对CCH大鼠rCBF的影响并探讨电针改善CCH大鼠rCBF的机制。方法取健康SPF级雄性SD(Sprague Dawley)大鼠(3月龄)90只,随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、假电针组(SEA组)、2Hz电针组(2Hz组)、15Hz电针组(15Hz 组)、100Hz 电针组(100Hz 组)、2/15Hz 电针组(2/15Hz 组)、2/50Hz 电针组(2/50Hz组)、2/100Hz电针组(2/100Hz组),每组各10只。各组大鼠称重后在异氟烷吸入麻醉下行2-VO手术复制CCH模型(S组仅分离双侧颈总动脉,不予结扎处理),术后第二天进行电针治疗及平衡处理:各电针组取“百会”、“大椎”穴进行电针治疗,电针频率为各组对应频率,电流强度1mA,时间30min,SEA组输出电流为0mA,S组和M组进行平衡处理(抓取固定),每天一次。各组大鼠于造模后第21天开始进行行为学实验,第28天麻醉处死取材。观察指标:(1)各组于造模前、造模后30分钟、造模后2周及造模后4周(即处死前)检测大脑中动脉区域脑血流;(2)于术后第21天,使用Morris水迷宫、旷场和O迷宫实验检测大鼠在陌生环境下学习记忆能力和焦虑情绪;(3)采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大鼠脑内ROS、SOD、HIF-1α、ACh的表达情况。结果(1)局部脑血流比较结果:术后30分钟手术组大鼠脑血流显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01),随后脑血流逐渐增加,电针组大鼠脑血流增加较快。与M组相比,除1周100Hz组外,各电针组在各时相差异均有统计学意义(P<0.01);与SEA组比较,除100Hz组外,各电针组在各时相差异均有统计学意义(P<0.01);电针亚组之间比较,100Hz组脑血流增加较慢,从第1周开始,疏密波各组脑血流与100Hz组相比在各时相均有上升(P<0.05,P<0.01),15Hz组脑血流在第2周差异有统计学意义(P<0.05),2Hz组脑血流在第4周差异有统计学意义(P<0.01)。(2)行为学比较结果:1.水迷宫实验:水迷宫定位航行实验逃避潜伏期结果比较:随训练次数的增加,各组大鼠逃避潜伏期呈下降趋势,与S组相比,M组和100Hz组从第2天开始差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),SEA组和15Hz组在第4天和第5天差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与M相比,SEA组逃避潜伏期从第4天开始明显降低(P<0.01),100Hz组在第5天明显降低(P<0.01),其它各电针组从第3天开始下降明显(P<0.05,P<0.01);与SEA组相比,2Hz组、2A5Hz组和2/l00Hz组在第4天逃避潜伏期差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);电针亚组之间比较,与同时相100Hz组比较,2Hz组、2/15Hz组、2/50Hz组和2/100Hz组从第4天开始差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。水迷宫空间探索实验目标象限停留时间结果比较:与S组相比,M组、SEA组和100Hz电针组停留时间下降明显(P<0.01);与M组比较,SEA组和各电针组停留时间均增加(P<0.05,P<0.01);与SEA组相比,2Hz组和2/15Hz组、2/50Hz组停留时间较长(P<0.05);电针亚组之间比较:与100Hz组相比,2/15Hz组和2/50Hz组停留时间较长,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.旷场实验各组中央区域停留时间比较:与S组相比,M组和SEA组停留时间较少,差异具有统计学意义(P<0.05);与M组和SEA组比较,各电针组停留时间均有延长,其中2Hz组、15Hz组、2/15Hz组和2/50Hz组差异具有统计学意义(P<0.05);电针亚组之间比较结果显示:与100Hz组相比,2Hz组和2/15Hz组差异具有统计学意义(P<0.05)。3.0迷宫各组开放臂停留时间比较:与S组相比,2/15Hz组停留时间较长,差异具有统计学意义(P<0.05);与M组和SEA组比较,各电针组停留时间均有延长,其中2Hz组、15Hz组和2/15Hz组停留时间较长,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);电针亚组之间比较结果显示:与100Hz组相比,2/15Hz组停留时间较长,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)ELISA检测结果:1.海马与额叶ROS表达情况:与S组相比,手术组ROS浓度显著升高(P<0.01);与M组相比,各电针组ROS浓度显著降低(P<0.01),SEA组额叶ROS浓度显著降低(P<0.01);与SEA组相比,各电针组ROS浓度显著降低(P<0.01);电针亚组之间比较结果显示:在海马中,与2Hz相比较,2/15Hz组和2/50Hz组ROS浓度显著升高(P<0.01),与15Hz组和100Hz组比较,疏密波电针组ROS浓度均显著降低(P<0.01);在额叶中,2/15Hz组ROS浓度较15Hz组和100Hz组均降低(P<0.05)。2.海马与额叶SOD表达情况:与S组相比,手术组SOD活性显著降低(P<0.01);与M组相比,各电针组SOD活性均升高(P<0.05,P<0.01);与SEA组相比,疏密波各组海马SOD活性显著升高,2/15Hz组、2/50Hz组额叶SOD活性显著升高(P<0.01),电针亚组之间比较结果显示:疏密波各组海马SOD活性与连续波各组相比均明显升高(P<0.01);2/15Hz组额叶SOD活性较2Hz组、100Hz组上升(P<0.05);2/50Hz组额叶SOD活性较100Hz组上升(P<0.05)。3.海马与额叶HIF-1α表达情况:与S组相比,手术组HIF-1α浓度显著上升(P<0.01);与M组、SEA组相比,电针各组HIF-1α浓度显著上升(P<0.01);电针亚组之间比较结果显示:在海马中,与100Hz组比较,其余各电针组HIF-1α浓度均显著升高(P<0.01),在额叶,15Hz组和疏密波各组HIF-1α浓度较100Hz组显著升高(P<0.01),2/15H组HIF-1α浓度较2Hz组显著升高(P<0.01)。4.海马与额叶ACh表达情况:与S组相比,手术组ACh浓度显著降低(P<0.01);与M组相比,除100Hz组海马ACh浓度外,各电针组ACh浓度均显著升高(P<0.01);与SEA组相比,海马中疏密波各组ACh浓度显著升高(P<0.01),额叶中电针各组ACh浓度均上升(P<0.05);电针亚组之间比较结果显示:连续波各组海马ACh浓度较100Hz组显著上升(P<0.01),2/50Hz组额叶ACh浓度较连续波各组均有升高(P<0.05)。结论(1)电针能提高CCH模型大鼠脑血流量并改善其认知能力:(2)连续波(2Hz,15Hz)及疏密波(2/15Hz,2/50Hz,2/100Hz)电针对CCH大鼠脑血流及认知能力的改善效果优于连续波(100Hz)电针,其中2/15Hz疏密波效果较好;(3)连续波(2Hz、15Hz)和疏密波(2/15Hz、2/50Hz)电针能缓解CCH大鼠的焦虑情绪,其中2/15Hz效果较好;(4)电针通过下调ROS的表达、增加SOD活性并促进HIF-1α、ACh的表达是改善CCH模型大鼠脑血流量的机制之一。