【摘 要】
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目的探讨康莱特注射液体外对晚期NSCLC患者及健康志愿者外周血来源诱导培养的自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）的增殖、免疫表型及其对肺癌A549细胞杀伤活性的影响。方法分离晚期NSCLC患者（腺癌）及健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）,第1天加入 rhIL-2（1000IU/ml）、抗 CD3 单抗（10ng/ml）,置 37℃、5%C02培养箱中培养,每隔24小时补
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目的探讨康莱特注射液体外对晚期NSCLC患者及健康志愿者外周血来源诱导培养的自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）的增殖、免疫表型及其对肺癌A549细胞杀伤活性的影响。方法分离晚期NSCLC患者（腺癌）及健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）,第1天加入 rhIL-2（1000IU/ml）、抗 CD3 单抗（10ng/ml）,置 37℃、5%C02培养箱中培养,每隔24小时补加CD3单抗10ng/ml,连续添加4天。第6天根据添加不同浓度的康莱特注射液分为A-E 5组:A组（不加康莱特）,B-E组（分别加康莱特0.25、0.5、1、2 μ l/ml）。细胞培养第10天及第15天,采用全自动血细胞计数仪计数各组NK细胞的增殖情况,第15天采用流式细胞术检测各组NK细胞中CD3-D56+细胞比例,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组NK细胞上清液中IFN-γ及TNF-α的分泌水平,CCK-8法检测各组NK细胞对肺癌A549细胞的杀伤活性。结果1.倒置显微镜下观察NK细胞体积较小,圆形透亮,在培养基中呈悬浮生长。各组NK细胞在培养第7天开始分裂增殖,细胞生长快,数量逐渐增多,各组间差异不明显。细胞培养至第10天,A、B、C、D、E组均有细胞集落形成,但A组和B组细胞集落体积较小,集落数较少,而C、D、E组细胞集落体积较大,集落数较多,尤以D组最明显。2.随着培养时间的延长,晚期NSCLC患者样本组和健康人样本组中,各组NK细胞增殖均升高。1 μ l/ml KLT组NK细胞的增殖显著升高（P＜0.01）,0.5 μ l/ml KLT组、2 μ l/ml KLT组NK细胞增殖明显升高（P＜0.05）,0.25 μ l/ml KLT组NK细胞增殖升高不明显（P＞0.05）。各组细胞活率均保持在90%以上。3.晚期NSCLC患者样本组流式细胞术检测结果示,1 μ l/ml KLT组NK细胞中CD3-CD56+细胞比例显著升高（P＜0.01）,2 μ l/ml KLT 组中 CD3-CD56+细胞比例明显升高（P＜0.05）,0.25 μ l/ml KLT 组、0.5 μ l/ml KLT组中CD3-CD56+细胞比例升高不明显（P＞0.05）;健康人样本组流式细胞术检测结果示,1 μ l/ml KLT 组中 CD3-CD56+细胞比例显著升高（P＜0.01）,0.5 μl/ml KLT 组、2 μ 1/ml KLT 组中 CD3-CD56+细胞比例明显升高（P＜0.05）,0.25 μ l/ml KLT 组中 CD3-CD56+细胞比例升高不明显（P＞0.05）。4.晚期NSCLC患者样本组和健康人样本组中,0.5 μ l/ml KLT组、1μl/ml KLT组、2 μl/ml KLT组NK细胞分泌的IFN-γ和TNF-α均高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）,并且这三组NK细胞对肺癌A549细胞的杀伤活性也显著高于对照组（P＜0.01）。其中1μl/ml KLT组NK细胞分泌的IFN-γ和TNF-α最高,杀伤活性也最高,与其它组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论康莱特注射液对NK细胞的增殖具有一定的促进作用;康莱特注射液能够提高NK细胞中CD3-CD56+细胞比例;康莱特注射液增强NK细胞对肺癌A549细胞的杀伤活性可能与康莱特注射液上调NK细胞IFN-γ及TNF-α的表达有关。
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