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目的建立坐骨神经分支选择性损伤(SNI)诱导的神经病理痛模型,运用三磷酸腺苷受体小RNA(P2X3 siRNA)干预,观察其对SNI大鼠的足跖机械缩足阈(PWT)及术侧L4-6背根神经节(DRG)水平瞬时感受器电位受体1(TRPV1)的影响,探讨P2X3在SNI模型中的作用及其与TRPV1的关系。观察比较不同频率电针(EA)对SNI大鼠PWT的干预效应及DRG水平P2X3总蛋白、浆蛋白及阳性细胞表达的影响,明确EA干预SNI诱导神经病理痛的优效频率,揭示对外周P2X3膜转位的调控作用。方法第一部分:将SD雄性大鼠随机分为:假模型(Sham SNI)组、模型对照(SNI)组。采用SNI造模方法,建立SNI诱导性神经病理痛大鼠模型;Sham SNI组大鼠仅暴露神经后缝合,不结扎神经。分别于SNI造模后1d、3d、7d、14d检测大鼠术侧和Sham SNI组大鼠足跖机械缩腿阈(PWT)。采用免疫印迹(WB)法检测术侧L4-6 DRG水平P2X3总蛋白表达。选择3天作为鞘内置管(i.t.)干预时间,将鞘内置管成功的大鼠随机分为假模型(Sham SNI)组、模型对照(SNI)组、模型+Sham SNI siRNA(SNI+Sham SNI)组、模型+P2X3 siRNA(SNI+P-)组。采用SNI相同造模方法对SNI组、SNI+Sham SNI组及SNI+P-组大鼠进行造模。SNI+Sham SNI组和SNI+P-组大鼠分别于SNI造模前1d、2d、3d及SNI造模后1d、3d鞘内注射相同剂量生理盐水和P2X3 siRNA溶液。分别于鞘内置管前、SNI造模前及鞘内注射后1d、3d检测大鼠术侧PWT。采用免疫印迹(WB)法检测大鼠术侧L4-6 DRG水平P2X3及TRPV1总蛋白表达及免疫荧光(IF)双标法检测术侧L4-6DRG水平P2X3与TRPV1阳性细胞共表达。第二部分:将SD雄性大鼠随机分为假模型(Sham SNI)组、模型对照(SNI)组、2Hz电针(2Hz)组、100Hz 电针(100Hz)组、2/100Hz 电针(2/100Hz)组及假电针(Sham EA)组。SNI造模方法同第一部分。模后1d,电针组大鼠接受电针刺激,选用术侧“足三里”和“昆仑”两穴;刺激参数为:频率:2Hz、100Hz、2/100Hz连续波,强度:0.5mA、1mA、1.5mA各10min,共30min;Sham EA组针仅刺入皮下,不达到肌层,且不采用电针,各组分别于模后每日进行电针干预,共干预14d,分别于SNI造模前、造模后24h EA干预前及造模后1d、3d、7d、14d EA干预后检测PWT。采用免疫印迹(WB)法检测大鼠术侧L4-6DRG水平P2X3的总蛋白及浆蛋白表达和免疫荧光(IF)法检测P2X3阳性细胞数。结果第一部分:(1)P2X3 siRNA对SNI大鼠PWT的影响:与Sham SNI组大鼠比较,SNI组、SNI+Sham SNI组大鼠各时点术侧PWT显著降低(P<0.01);与SNI组大鼠比较,SNI+P2X3 siRNA组大鼠各时点术侧PWT增加(P<0.05)。(2)P2X3 siRNA对P2X3总蛋白表达的影响:与SNI组相比,SNI+P-组大鼠L4-6 DRG水平P2X3总蛋白表达显著下降(P<0.01)。(3)P2X3 siRNA对TRPV1总蛋白表达的影响:与Sham SNI组大鼠相比,SNI+P-组TRPV1总蛋白表达上升(P<0.05)。第二部分:(1)电针对SNI大鼠PWT的影响:SNI造模后,与Sham SNI组大鼠相比,SNI组、2Hz组、100Hz组、2/100Hz组及ShamEA组大鼠术侧足跖PWT均显著降低(P<0.01);EA干预后,与SNI组大鼠相比,各电针组大鼠在各时间点术侧PWT均有一定的升高,其中2Hz组在各个时间点术侧PWT均显著升高(P<0.01),且在7d、14d2Hz组术侧PWT高于100Hz组与2/100Hz组(P<0.05)。(2)电针对SNI大鼠P2X3蛋白表达的影响:与Sham SNI组大鼠相比,SNI组、Sham EA组术侧L4-6DRG水平P2X3浆蛋白显著下降(P<0.01);与SNI组大鼠相比,各电针组均上调了 P2X3的浆蛋白表达,其中2Hz作用较明显,100Hz作用最弱;与2Hz组相比,100Hz组、2/100Hz组上调P2X3浆蛋白表达作用较弱(P<0.05)。而大鼠术侧L4-6 DRG水平P2X3总蛋白的表达各组间无差异。(3)电针对SNI大鼠P2X3阳性细胞表达的影响:大鼠术侧L4-6DRG水平P2X3阳性细胞数各组间无差异。结论在神经病理痛中,DRG水平可能存在P2X3抑制TRPV1的关系;SNI诱导神经病理痛的外周敏化可能与损伤侧L4-6 DRG水平P2X3发生膜转位有关;电针尤其是2Hz电针对神经病理痛有良好的镇痛效应,其外周机制可能与其逆转P2X3的膜转位有关。