近年来，甲型流感病毒数次爆发流行，对人类生命健康形成了很大威胁。2010年10月，世界卫生组织报告，宣称甲型H1N1流感病毒在澳大利亚已经发生变异。因此，研究清楚甲型H1N1流感病毒的致病机理，对认识流感病毒、保护人类健康是非常有必要的。　　病毒感染宿主细胞，是病毒与宿主细胞之间互相作用的过程，包括吸附、穿入、合成、组装、释放等一系列步骤。病毒只有到达细胞的特定部位，才能有效感染细胞，一般情况下，DNA病毒需进入细胞核，RNA病毒则要到达细胞核的周边区域。病毒的入胞途径因病毒和细胞种类的不同也不一样。受体介导病毒入胞途径认为，流感病毒感染细胞，首先是流感病毒的HA（Hemagglutinin）与宿主细胞表面糖链受体结合。根据唾液酸与单糖结合的化学键不同，可分为α-2，6和α-2，3唾液酸受体。人流感病毒包膜HA结合α-2，6唾液酸受体，可以用SNA染色鉴定，禽流感病毒倾向于结合α-2，3唾液酸受体，可以用MAA1和MAA2染色鉴定。但是最近一些研究结果发现，流感病毒在感染宿主细胞时，存在与细胞表面唾液酸受体分布不一致的情况。　　已知的大分子物质内吞入胞的主要途径有:(1)网格蛋白介导的内吞途径；（2）小窝蛋白依赖型内吞途径；（3）巨胞饮途径；（4）非网格蛋白小窝蛋白依赖的内吞。甲型H1N1流感病毒是人流感病毒，本实验主要研究甲型 H1N1流感病毒的经网格蛋白介导内吞入胞途径：1.我们采用荧光双标技术，H1N1感染A549细胞和CHO-K1细胞后，不同时间点收样，观察细胞的网格蛋白的分布变化及其与 H1N1的共存情况；2.我们用网格蛋白的抑制剂氯丙嗪（Chlorpromazine）处理细胞，通过细胞增殖毒性-毒性检测试验得出合适的浓度；3.用氯丙嗪按实验得出浓度处理细胞，并设立阴性对照，通过蛋白凝胶电泳和PCR技术检测病毒表达量；4.通过转铁蛋白吸收实验验证氯丙嗪特异性的阻断了网格蛋白的活性；5.通过数据筛选，我们用PCR技术检测药物处理的细胞和正常细胞中GM2A（神经节苷脂激活蛋白）的变化，探究GM2A对病毒网格蛋白介导途径入胞的影响。　　通过实验，我们得出：　　1.免疫荧光双标结果：H1N1感染细胞后，30min、3h、12h收样，同时设立阴性对照。荧光标记后镜下观察，发现感染30min时，病毒位于细胞膜附近，3h后病毒量增加，12h处，病毒量明显增加且聚集在细胞核周围区域，病毒荧光信号与网格蛋白萤光信号有重合现象。表明病毒可以通过网格蛋白介导途径入胞，随着感染时间的延长，病毒逐渐向细胞核移动，病毒量增加。　　2.细胞增殖-毒性检测结果：为保证细胞在药物处理后生长状态没有太大改变，我们用CCK8试剂盒检测合适的实验浓度。设立梯度氯丙嗪浓度0μg/ml、2μg/ml，5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml，加入铺好的96孔板中，并按试剂盒步骤测定药物处理后的细胞活性。结果显示A549细胞在氯丙嗪浓度为5μg/ml时，细胞活性为86.04％，在10μg/ml时细胞活性为83.72%，在20μg/ml时则降低为63.95%；CHO-K1细胞在氯丙嗪浓度为2μg/ml时活性为94.76%，在5μg/ml时活性为85.07%，在20μg/ml时降低为40.31%。故本实验采用氯丙嗪浓度A549细胞为5μg/ml和10μg/ml，CHO-K1细胞采用2μg/ml和5μg/ml。　　3.蛋白凝胶电泳和PCR结果：用上述药物浓度处理细胞，同时设立未加药物的阴性对照组。用H1N1分别感染细胞，于3h、6h、12h、24h后收样。结果显示，随着时间延长，病毒NP（核蛋白）条带变粗，阴性对照组条带颜色重于对应的药物处理组条带，每一细胞的高浓度药物处理组条带基本没有显示颜色。PCR结果显示，H1N1感染12h处，流感病毒基质蛋白（matirx protein，M1）在对应细胞中阴性对照组表达量明显高于药物处理组，而在高浓度氯丙嗪处理组则扩增不出正常的曲线。　　4.转铁蛋白吸收实验结果：氯丙嗪处理A549细胞和CHO-K1细胞，设立阴性对照，转铁蛋白孵育后，提细胞总蛋白，蛋白凝胶电泳检测各组细胞中转铁蛋白的吸收情况。结果表明，阴性对照组转铁蛋白条带最明显，低浓度氯丙嗪处理组条带颜色重于高浓度氯丙嗪处理组。　　5.GM2A结果：GM2A基因编码一种叫GM2神经节苷脂激动剂的小糖脂蛋白，该蛋白与自然免疫和T细胞的激活有关。我们用A549细胞，设立H1N1感染组和未感染组，每组中设立药物处理组和未加药物的对照组，病毒感染12h后收样，PCR结果显示感染组中的氯丙嗪处理组GM2A表达量最高，其次是未感染组中的药物处理组，而感染组和未感染组中的未加药对照组GM2A表达量基本持平。　　综合我们的实验结果，可以得出以下结论：甲型H1N1流感病毒可以感染不含有α-2，6唾液酸受体的CHO-K1细胞；氯丙嗪对网格蛋白介导的入胞途径有阻断作用，在不影响细胞生长的情况下，加大药物浓度，病毒进入细胞的量减少明显；氯丙嗪对A549细胞内GM2A的量产生影响，这可能对H1N1进入细胞产生影响，并对临床治疗流感有一定的帮助。