目的基于蛋白质组学技术（proteomics）建立经黄体生成素（luteinizing hormone,LH）干预大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells,GCs）蛋白质组谱,并进一步分析差异信号通路Hippo信号通路在LH干预颗粒细胞过程中对芳香化酶CYP19表达以及雌二醇合成的影响。方法1.体外分离培养大鼠原代卵巢颗粒细胞,HE染色检测颗粒细胞形态、卵泡刺激素受体（follicle-stimulating hormone receptor,FSHR）细胞免疫荧光检测颗粒细胞纯度。LH处理为实验组,生理盐水处理作为对照组。利用非标记定量（Label-free quantification,LFQ）技术进行蛋白质定量分析后,筛选显著差异蛋白,基于数据库信息比对,对差异表达蛋白进行生物信息学分析,并通过蛋白质印迹技术（Western blot）对部分差异蛋白进行验证;2.按方法1培养的卵巢颗粒细胞,然后根据分组即对照组、LH组、MST抑制剂（XMU-MP-1）组和LH+XMU-MP-1组,分别使用相应浓度的试剂再干预颗粒细胞。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察YAP和CYP19表达的部位和变化。Western blot测定各组YAP和CYP19蛋白表达量。酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）检测各组雌二醇分泌含量。结果1.LFQ蛋白质组学结果显示,与对照组相比,LH干预组共有57个蛋白表达有显著差异,其中25个上调,包括核糖体蛋白（60S ribosomal protein）、蛋白质运输蛋白（Protein transport protein）、组蛋白（Histone）、Pard3（Partitioning defective 3 homolog）、非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Non-specific serine/threonine protein kinase）等;下调蛋白32个,包括适配分子Crk（Adapter molecule crk）、谷胱甘肽s-转移酶P（Glutathione S-transferase P）、NAD（P）H脱氢酶[醌]1（NAD（P）H dehydrogenase[quinone]1）、醛酮还原酶（Aldo-keto reductase）等。根据GO分析,LH对大鼠卵巢颗粒细胞生物过程的干预作用体现在成纤维细胞增殖的负调控、应激激活蛋白激酶信号级联反应、protein-DNA复杂装配、动物器官再生、染色质组装或拆卸、DNA包装、雌二醇应答、蛋白代谢过程调控和细胞蛋白代谢过程等;对颗粒细胞分子功能的干预作用体现在肽链内切酶调节活动、染色质DNA结合、肽酶调节活性、酶抑制剂活性、肝素结合、连接酶的活动、形成碳氮键,粘多糖结合、生长因子结合、硫化合物结合、核糖体结构成分、分子结构和活性等。从KEGG通路分析来看,差异蛋白存在于增殖物激活受体（PPAR）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、RAS相关蛋白1（Rap1）信号通路、Erb B信号通路、癌症信号通路、长寿调节通路、趋化因子信号通路、Hippo信号通路、神经营养蛋白信号通路和胰岛素信号通路等相关。Western blot检测差异蛋白PARD3、MARK3、GSTP1和NQO1的表达,与蛋白质组学结果一致。2、LH（1.5IU/ml）上调原代大鼠卵巢颗粒细胞Hippo信号通路中P-MST和P-YAP基因表达,下调YAP基因表达;YAP显著分布在大鼠卵巢颗粒细胞细胞核中,LH（1.5IU/ml）减少了YAP的核易位;LH（1.5IU/ml）使原代大鼠卵巢颗粒细胞中芳香化酶CYP19表达降低;MST（mammalian Sterile 20-like kinases 1/2）抑制剂XMU-MP-1（3.0μM）上调大鼠原代卵巢颗粒细胞中YAP表达与LH对YAP的作用相反;与对照组相比LH组同时下调YAP和CYP19表达,XMU-MP-1同时使YAP和CYP19表达上调,与XMU-MP-1处理组相比,LH+XMU-MP-1组中YAP和CYP19的表达降低,且以上四组中GCs雌二醇的合成量变化趋势与CYP19的表达变化趋势一致。结论LH干预后卵巢颗粒细胞蛋白表达存在显著差异,表明LH可引起颗粒细胞蛋白及相关的生物信号通路改变等,其中包括PARD3、MARK3、GSTP1和NQO1等影响细胞增殖及氧化应激相关等蛋白的差异表达,涉及Hippo、胰岛素、MAPK及癌症发生等多个信号通路,且LH通过激活Hippo信号通路减少YAP活化调控CYP19的表达从而起到调节雌二醇激素分泌的作用。