亚麻籽油和亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠的作用与初步机制研究

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:A467329555
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目的评价膳食亚麻籽油(FO)和亚麻木酚素(SDG)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠的干预效果,初步揭示可能的作用机制。方法将6周龄雌性SD大鼠随机分为6组(8只/组):阴性对照组(PF/CON)、模型组(PF/MOD)、亚麻籽油对照组(FO/CON)、亚麻籽油干预模型组(FO/MOD)、亚麻木酚素对照组(SDG/CON)、亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)。采用来曲唑造模法建立PCOS大鼠模型,根据阴道分泌物涂片中细胞种类、数量的变化及病理检查判断造模是否成功。造模成功后,各组分别灌胃生理盐水(PF/CON组和PF/MOD组)、FO溶液(FO/CON组和FO/MOD组)、SDG溶液(SDG/CON组和SDG/MOD组)8周,期间监测大鼠体重(每周)和动情周期变化(每日)。干预结束后收集大鼠粪便和阴道分泌物,随后处死大鼠,收集血浆(清)及卵巢组织样本检测相应指标。(1)卵巢组织石蜡包埋切片后采用苏木素-伊红(HE)染色法评估大鼠卵巢病理损伤情况。(2)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测大鼠血浆性激素指标:睾酮(T)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、孕酮(PROG)和性激素结合球蛋白(SHBG)的水平。(3)采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FPG),ELISA法检测空腹胰岛素(FINS)的变化。(4)采用酶法检测大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。(5)采用酶法检测血清氧化应激指标:丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性。(6)采用ELISA法检测血浆和卵巢匀浆炎症因子:白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的浓度;采用鲎试剂显色基质法检测血浆脂多糖(LPS)的水平。(7)利用流式细胞术检测大鼠外周血、脾脏和骨髓中髓源抑制细胞(MDSCs)以及卵巢组织中巨噬细胞(Mψs)比例的变化。(8)通过16S r DNA高通量测序分析大鼠肠道菌群和生殖道菌群多样性及丰度的变化。(9)利用气相色谱-质谱(GC-MS)法检测大鼠粪便中短链脂肪酸(SCFAs)水平。(10)最后,通过相关性分析评估肠道/生殖道菌群与炎症因子、性激素以及菌群代谢物的相关性。结果(1)动情周期、卵巢大体和卵巢组织HE染色结果表明:来曲唑干预后动情周期紊乱、卵巢组织囊性卵泡增加、黄体减少或消失,提示PCOS大鼠造模成功;FO和SDG干预后显著改善了动情周期紊乱,卵巢组织可见正常卵泡发育和黄体生成。(2)FO和SDG干预后缓解了性激素紊乱,体现在显著降低了大鼠血浆T和LH水平,提高了E2和PROG水平。(3)FO和SDG干预后降低了FINS水平、HOMA-IR指数和体重。(4)FO和SDG干预通过提高HDL-C水平,降低TC、TC和LDL-C水平,改善了血脂异常。(5)FO和SDG干预增加了大鼠血清抗氧化酶GSH-PX和T-SOD水平,减少了MDA水平,进而减轻氧化应激损伤。(6)FO和SDG干预抑制了血浆和卵巢的促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1)水平,提高抗炎因子IL-10浓度,此外还降低了血浆LPS水平。(7)FO和SDG干预后外周血、脾脏、骨髓的MDSCs细胞比例显著增加,卵巢Mψs比例显著降低。(8)肠道菌群测序结果显示,FO干预后显著降低Firmicutes/Bacteroidetes、Actinobacteria和Bacteroides的相对丰度比例;提高Lactobacillus、Allobaculum、Desulfovibrio、Butyrivibrio和Bifidobacterium的丰度。SDG干预后明显降低Firmicutes/Bacteroidetes、Bacteroides和Parasutterella的相对丰度比例;提高Lactobacillus、Allobaculum、Butyrivibrio、Ruminiclostridium和Bifidobacterium的丰度。(9)生殖道菌群测序结果显示,FO干预后明显降低Proteobacteria和Streptococcus的相对丰度;提高Bacteroidetes、Faecalibacterium、Lactobacillus和Parabacteroides的相对丰度。SDG干预后明显降低Proteobacteria的相对丰度;提高Bacteroidetes、Faecalibacterium和Lactobacillus的相对丰度。(10)FO和SDG干预后SCFAs乙酸、丙酸、丁酸和戊酸的含量显著增加。(11)相关性分析结果显示,Lactobacillus、Butyrivibrio、Desulfovibrio和Bifidobacterium的丰度与SCFAs、E、PROG、IL-10等呈正相关,与LPS、T、LH和促炎因子呈负相关。Actinobacteria、Bacteroides、Proteobacteria和Streptococcus的丰度与SCFAs、E、PROG、IL-10等呈负相关,与LPS、T、LH和促炎因子呈正相关。结论膳食FO和SDG可通过减轻炎症、调节性激素和肠道/生殖道菌群改善PCOS大鼠。
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