亨廷顿疾病(HD)是一种与蛋白质错误折叠相关的神经退行性疾病。它是一种常染色体显性遗传疾病,与Huntingtin基因的突变相关。Huntingtin基因编码亨廷顿蛋白,亨廷顿蛋白N端第一外显子(ExonⅠ)内具有重复谷氨酰胺序列(poly-Q),HD病人的poly-Q序列发生延长突变。亨廷顿蛋白或其包含第一外显子的片段能发生聚集和形成纤维,而且poly-Q序列对邻近结构域的结构和功能可能产生影响。Ure2是一个酵母中的prion蛋白,它的C端结构域(CTD)是类似谷胱甘肽转移酶(GST)的球形结构域,形成双体结构。同时,CTD具有多种酶活性,且在纤维状态下也同样具有酶活性。　　 该研究构建了49Q以及20Q的亨廷顿蛋白第一外显子与Ure2-CTD的融合蛋白,以研究亨廷顿蛋白第一外显子对邻近结构域的影响。这两个融合蛋白都能在大肠肝菌C41细胞中进行表达,随后联合采用镍柱纯化、离子交换、分子筛等方法进行纯化。最终纯化蛋白在SDS-PAGE上呈现两条带,进一步通过native-PAGE、蛋白质印迹法(Westernblotting),质谱分析,蛋白质N端测序等方法分析此两条带,推测此两条带来自同一蛋白双体,其中一个单体发生断裂而丢失部分N端的亨廷顿蛋白第一外显子序列。这种断裂可能发生在蛋白质表达过程中,其原因尚不明确,有待进一步研究。上述结果为poly-Q融合蛋白的表达纯化及相关研究提供了参考。通过圆二色谱、去折叠稳定性实验、GRX酶活力测量观察了亨廷顿蛋白第一外显子的融合对Ure2 C端结构和功能的影响。与Ure2 C端结构域相比,融合蛋白的α螺旋含量有所增加,在盐酸胍中的稳定性没有变化,GRX酶活力有所下降。　　 同时也研究了Hsp40分子伴侣影响Ure2成纤维的机制。分子伴侣是细胞内蛋白质质量控制系统的主要成员,主要功能是帮助新生肽链正确折叠和发生错误折叠的蛋白质返回天然状态。已有研究表明,在特定情况下,在酵母中过量表达全长Hsp40或片段,能够治愈或部分治愈细胞的prion状态;全长Hsp40-Ydj1在体外通过与天然态Ure2相互作用而抑制Ure2的淀粉样纤维化。因此,为了鉴定与Ure2相互作用的Hsp40结构域,探测了酵母Hsp40成员Ydj1和Sis1的不同结构域片段对Ure2体外成纤维的影响。结果表明Ydj1片段和Sis1片段表现出了对Ure2体外纤维化的抑制作用,但这一结果还需要进一步的实验来验证。