目的：研究H22小鼠肝癌细胞(H22细胞)全细胞抗原致敏树突状细胞(dendritic cell, DC)前后,DC表型变化(表面抗原CD80、CD86、CD40、MHC Ⅱ表达的变化)及致敏DC激活肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte, TIL)对H22细胞的体外杀伤活性,探讨H22细胞全细胞抗原致敏DC的表型变化在其激活TIL特异性杀伤H22细胞中的意义,尤其是H22细胞全细胞抗原致敏DC能提高TIL抗肝癌活性的机理。方法：①在BALB/c小鼠腋窝皮下接种对数生长期的H22细胞,约12天后皮下瘤体直径达0.8cm左右,成荷瘤小鼠。②从荷瘤小鼠皮下无菌分离出H22细胞瘤体,采用不连续密度梯度法分离出其中H22细胞和TIL。TIL用重组小鼠白细胞介素-2(recombined murine IL-2, rmIL-2)体外扩增。H22细胞一部分用于制备H22细胞全细胞抗原,另一部分冻存用于后续的细胞杀伤活性检测。③取对数生长期的H22细胞,经过4个冻融周期后,过滤获得H22细胞全细胞抗原。④无菌取出小鼠脾脏,研磨、过滤为细胞悬液,裂解红细胞,洗涤去除红细胞碎片,保留小鼠脾淋巴细胞,用重组小鼠白细胞介素-2(recombined murine IL-2,rmIL-2)体外扩增。⑤取得小鼠骨髓细胞,用连续贴壁法去除其中的淋巴细胞、NK细胞及巨噬细胞等,并以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant murine granulocyte marcophage-colony stimulating factor, rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(recombinant murine interleukin-4, IL-4)诱导生成未成熟DC。⑥在DC培养的第5天加入H22细胞全细胞抗原,继续培养48小时以致敏,以流式细胞术测定致敏前后的DC表面抗原CD80、CD86、CD40、MHC Ⅱ表达率。⑦分别用H22细胞全细胞抗原、已致敏和未致敏的DC激活TIL和脾淋巴细胞。⑧细胞杀伤活性测定：以CCK-8法评估TIL和脾淋巴细胞在激活前后对H22细胞的杀伤活性(效靶比为10：1)。结果：(1)DC形态学观察：DC的骨髓前体细胞为贴壁细胞,多为小而圆的单个核细胞,胞膜光滑、无突起,成小细胞团样贴壁生长。第2天全量换液可见贴壁细胞集落及少量半悬浮集落,第5天集落规模增大,细胞增大,表面毛刺状,少量细胞表面有树突状突起,分支较少；致敏2天后(第7天)DC脱离集落,呈悬浮生长,胞体大而圆,突起多而密,并有部分细胞外周突起为绒毛样。(2)DC表型变化：①培养第5天后,DC纯度(CDllc阳性细胞率)达65%以上；②致敏DC表面抗原CD80、CD86、CD40和MHC Ⅱ的表达率分别为(57.55±7.32)%、(54.49±14.20)%、(46.79±8.25)%和(53.94±13.94)%],未致敏DC表面抗原CD80、CD86、CD40和MHC Ⅱ的表达率分别为(20.01±5.22)%、(24.56±9.08)%、(18.06±5.13)%和(30.24±8.39)%]。③DC致敏后其表面抗原CD80、CD86、CD40、MHC Ⅱ表达率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)对H22细胞杀伤活性检测结果：①TIL的杀伤活性[(47.35±3.40)%]远高于脾淋巴细胞的杀伤活性[(28.45±2.56)%],(P<0.01)；不同方式处理的TIL的杀伤活性均高于相应方式处理的脾淋巴细胞的杀伤活性,差异有统计学意义(P<0.01)。②已致敏DC激活的TIL的杀伤活性[(81.90±2.90)%]高于其它方式处理的TIL及未激活TIL的杀伤活性,差异有统计学意义(P<0.01)；与未致敏DC共培养的TIL杀伤活性[(52.80±3.12)%]略高于H22细胞全细胞抗原激活的TIL[(49.31±3.60)%]及未处理TIL[(47.35±3.40)%]的杀伤活性(P<0.01)；而H22细胞全细胞抗原激活的TIL与未处理TIL的杀伤活性基本相同,差异无统计学意义(P>0.05)。③致敏DC激活的脾淋巴细胞[(62.64±3.94)%]的杀伤活性高于其它方式刺激的脾淋巴细胞及未处理的脾淋巴细胞[(28.45±2.56)%]的杀伤活性。结论：H22细胞全细胞抗原可致敏小鼠DC,并促进其成熟。H22细胞全细胞抗原致敏DC后,DC表面抗原CD80、CD86、CD40、MHC Ⅱ的表达率均有明显升高。H22细胞全细胞抗原致敏DC激活的TIL对H22细胞具有很强的体外特异性杀伤活性。H22细胞全细胞抗原致敏DC的表面抗原CD80、CD86、CD40、MHC Ⅱ的表达增高有利于DC对TIL的活化及抗原递呈,可能是H22细胞全细胞抗原致敏DC能提高TIL抗肝癌活性的机理之一。