HMGB1对喉癌发生、发展的影响及其机制初探

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目的:高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Box 1,HMGB1)是高迁移率族蛋白家族(High Mobility Group,HMG)中的一类,在哺乳动物中高度表达且是一类高度保守的蛋白质。依据目前研究可知,HMGB1在肿瘤的发生发展以及治疗过程中均有促进及抑制作用,其作用主要取决于在肿瘤细胞中的位置,以及肿瘤微环境的影响。但是,HMGB1在喉癌中的作用及其机制目前尚不清楚。故本研究旨在探索HMGB1对喉癌发生、发展的影响及其机制初探。方法:首先,研究HMGB1对喉癌发生、发展的影响,利用免疫组化方法检测HMGB1在人体喉癌组织中的表达,对其进行评分、分级行卡方检验分析其表达的多少是否与喉癌的淋巴结转移、T分期、病理分期、肿瘤细胞分化程度以及肿瘤的分型有关,同时行生存分析,了解HMGB1表达的多少与患者预后关系。然后用Western blot及免疫荧光验证HMGB1在Hep2细胞中的表达,划痕实验、软琼脂克隆形成实验观察其对Hep2细胞增殖、转移及侵袭的作用。其次,将Hep2细胞株中的HMGB1用shRNA敲减后行基因芯片分析得出差异表达的基因。并从其中选出明显差异表达且报道量少的20个下调基因行HCS增殖实验检测,从中选出作用最显著的增殖相关阳性基因,用Quantitative Real-time PCR进一步验证其与HMGB1之间的关系。再次,以上结果提示HMGB1某种程度上能影响类SM蛋白6(SM-like 6,LSM6)基因的表达,故采用研究HMGB1在组织以及细胞中的表达及作用的方法探索LSM6的作用,同时用FACS法检测LSM6对细胞凋亡及周期的影响。结果:首先,HMGB1在人体喉癌组织以及Hep2喉癌细胞株中均高表达且能促进Hep2细胞的增殖、侵袭和转移。生存分析显示HMGB1与喉癌患者的生存率无明显相关性,但是肿瘤细胞分化程度低的癌组织中HMGB1蛋白的表达明显增高,说明HMGB1能够促进喉癌的发生以及发展。其次,与对照组相比在用shRNA敲减后的Hep2细胞株中有上调基因149个,下调基因355个,对从中选出的20个下调基因行HCS增殖检测,其中LSM6为增殖相关阳性基因,相较于本研究的中的其他基因具有更强的促进增殖作用,进一步验证说明沉默HMGB1的表达能够减少LSM6基因的表达,提示HMGB1在某种程度上能影响LSM6基因的表达。再次,LSM6在人体喉癌组织以及Hep2喉癌细胞株中均高表达,且能促进Hep2细胞株的增殖、侵袭和转移,还能促进细胞凋亡、调节细胞周期,增加S期和G2期的细胞。而且T分期或者临床分期晚期的患者LSM6的表达更多,虽然LSM6蛋白的表达对预后的影响没有统计学意义,但是其高表达具有一定缩短患者寿命的趋势。结论:HMGB1以及LSM6均在人喉癌组织以及Hep2细胞中高表达,且都能促进Hep2细胞的增殖、转移和侵袭,都对预后可能也有着不良的影响。某种程度上说明HMGB1促进喉癌的发展可能与LSM6有一定的联系。
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