家蚕C类凝集素BmS7对BmNPV的特异响应和抵抗机制研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lihaolong2005
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家蚕核型多角体病毒(BmNPV)病是养蚕业的一种重大传染疾病,目前尚无好的解决方法。家蚕抗BmNPV免疫机制中,模式识别受体是病毒感染细胞的重要途经,C类凝集素是很多昆虫先天免疫中主要的模式识别受体之一,且被越来越多的认为在免疫抗病中起重要作用,家蚕是否有这一免疫系统尚无报道。本研究通过家蚕添食BmNPV,qRT-PCR检测家蚕C类凝集素BmS7基因,及基因BmS7介导的固有免疫信号通路各基因的表达,研究其对BmNPV感染的应答特异性,研究结果可为培育抗病品种提供技术参考。1.BmNPV引起家蚕C类凝集素BmS7的特异性表达家蚕添食BmNPV、BmCPV,注射金黄色葡萄球菌、大肠杆菌,qRT-PCR检测家蚕C类凝集素BmS7基因,结果显示在家蚕中肠、脂肪体和血淋巴组织中,只有家蚕感染BmNPV后,家蚕C类凝集素BmS7的转录水平会发生极显著上调。推测家蚕C类凝集素BmS7基因表达变化对BmNPV感染是特有的。对不同品种家蚕,试验出现一致性的结果,进一步暗示了家蚕C类凝集素BmS7基因表达异常是对BmNPV感染的特异响应。2.家蚕C类凝集素BmS7蛋白在细胞中的作用位置家蚕中肠细胞中C类凝集素BmS7基因在蛋白水平上,感染BmNPV后的含量发生变化。家蚕感染BmNPV后,中肠细胞中的家蚕C类凝集素BmS7蛋白表达量远高于未感染的家蚕,推测基因BmS7在BmNPV感染后,mRNA和功能蛋白同步增长。免疫荧光标记试验表明,家蚕C类凝集素BmS7蛋白集中分布在细胞膜内侧,暗示了 C类凝集素BmS7蛋白作为一种模式识别受体,虽无跨膜结构域,但分析预测C类凝集素BmS7蛋白是细胞膜上受体的下游信息传递蛋白。3.家蚕C类凝集素BmS7对BmNPV抵抗能力和其介导的免疫通路给家蚕背脉注射dsRNA干扰家蚕C类凝集素BmS7基因的表达,再感染BmNPV,发现家蚕发病率增加,推测家蚕抵抗BmNPV的能力发生下降,;qRT-PCR结果显示,家蚕C类凝集素BmS7基因的表达发生下调,病毒载量升高。预示着家蚕C类凝集素BmS7基因在BmNPV感染的过程中发挥了重要作用;讨论家蚕C类凝集素BmS7基因可能介导的固有免疫通路Toll、IMD及JAK/STA中的靶标基因的表达检测结果显示,只对IMD通路的影响有显著差异。
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