内毒素又称为细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）,是革兰氏阴性菌细胞壁外膜中的重要组成成分,其对于提高细菌质膜的稳定性和保护菌株免受外界不利因素的影响发挥着重要的作用。然而,当细菌发生自身溶解、人工方法破坏细胞结构或者细胞活跃生长繁殖时,质膜中的LPS便会被释放出来。作为一种致病成分,LPS能够引起机体内毒素血症,严重者发生感染性休克、多器官功能衰竭和弥漫性血管内凝血等临床症状。作为机体最大的消化器官,肠道亦被认为是机体内最大的LPS储存库。肠道内生存着数以万亿计的共生菌群,当肠道内环境受到不利因素的影响时,如抗生素的广泛使用会有效地杀死致病菌,但是同时会释放出大量的LPS并使其在肠道中发生蓄积。肠道黏膜屏障作为机体阻止肠腔内容物以及病原微生物入侵的重要防线,能够保护肠上皮细胞免受不利条件的损害,继而将机体内环境与肠腔内环境分隔开来,在维持肠道内环境的稳态平衡作用中扮演着重要的角色。然而,LPS如何影响机体肠道黏膜屏障的结构与功能以及对其可能发挥作用的机制研究尚不明确。本研究分别以灌服0、200、600、1000?g/kg LPS溶液的小鼠和含400?g/m L LPS培养基处理的回肠上皮细胞为体内外试验模型,利用组织HE染色、PAS染色、免疫组化染色、ELISA、流式细胞术、透射电镜、Western blotting和q PCR等技术操作,解释LPS对肠道上皮屏障形态结构和功能的影响。已取得的研究结果如下:1.在16 d和32 d时采集不同剂量组小鼠的回肠组织,观察LPS对小鼠肠道组织形态和黏液层中黏蛋白2（MUC2）含量的变化。HE染色结果表明32 d时,中和高剂量组的小鼠回肠绒毛高度显著缩短（P<0.05）,低剂量组无显著性差异（P>0.05）,而低、中和高剂量组的隐窝深度显著加深（P<0.05）;免疫组化染色和ELISA结果均显示出低和中剂量组的回肠黏液层中MUC2的含量显著升高（P<0.05）,而高剂量组并无显著性差异（P>0.05）;PAS染色结果显示低和中剂量组的小鼠回肠杯状细胞的数目显著增多（P<0.05）,而高剂量组并无显著性差异（P>0.05）;同时,利用透射电镜观察回肠黏膜发现,高剂量的LPS能够使杯状细胞中的溶酶体数量增加,肠腔内的黏液层变得疏松,固有层淋巴细胞的数量随着剂量的升高而不断增多。2.在16 d和32 d时采集不同剂量组小鼠的血液、回肠肠系膜淋巴结和派氏结,检测LPS对小鼠回肠黏膜免疫应答的影响。血常规结果表明,随着LPS剂量的升高,血液中的白细胞、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞的数目显著下降;HE染色结果表明32 d时,LPS能够致使派氏结和肠系膜淋巴结的形态受损,且流式细胞结果显示LPS引起CD4+T细胞的比例减少,CD8+T细胞的数目增多,CD19+CD38+B淋巴细胞的比例下降;同时,利用ELISA试剂盒检测血液中抗体含量和炎性因子的水平,结果表明,高剂量组的Ig G和Ig A抗体水平下降,IFN-γ和IL-6的水平显著下降（P<0.05）,IL-10的含量显著升高（P<0.05）,而TNF-α、IL-2和IL-4细胞因子的水平变化无显著性差异（P>0.05）。3.体外试验通过使用添加400?g/m L的LPS培养基处理回肠上皮细胞12 h,24 h和36 h,分别利用Western blotting和q PCR检测上皮细胞紧密连接蛋白和TLR4/NF-κB通路相关因子的蛋白和m RNA的表达变化。结果表明,24 h时,LPS能够引起回肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin表达的显著下降（P<0.05）,36 h时极显著下降（P<0.01）;TLR4的蛋白表达在24 h和36 h极显著升高（P<0.01）,而在12 h无显著性差异（P>0.05）;NF-κB的蛋白表达在24 h和36 h显著降低（P<0.05）,而在12 h无显著性差异（P>0.05）;12 h时,LPS处理组的IκBα的磷酸化水平显著升高（P<0.05）,而在24 h和36 h无显著性差异（P>0.05）;此外,LPS能够致使Occludin、TLR4、My D88、IκBα和NF-κB m RNA表达极显著升高（P<0.01）。综上所述,LPS能够引起小鼠回肠绒毛形态结构发生改变,引起肠系膜淋巴结和派氏结中淋巴细胞的分化比例发生改变,继而导致相关炎性因子发生变化以及抗体的水平含量下降;LPS接触到上皮细胞后,可能通过影响上皮细胞TLR4/NF-κB通路相关因子的表达进而影响紧密连接蛋白的表达,导致上皮细胞屏障的破坏,继而加重肠道的损伤。