【摘 要】
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环境中很多细菌自身具有铬还原酶,对的六价铬Cr (Ⅵ)有很强的抗性。但哺乳动物对Cr (Ⅵ)却很敏感,长期处于Cr (Ⅵ)过量的环境中会诱发基因突变和癌变。本研究中将大肠杆菌中
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环境中很多细菌自身具有铬还原酶,对的六价铬Cr (Ⅵ)有很强的抗性。但哺乳动物对Cr (Ⅵ)却很敏感,长期处于Cr (Ⅵ)过量的环境中会诱发基因突变和癌变。本研究中将大肠杆菌中的铬还原酶基因yieF克隆后,分别构建重组的哺乳动物细胞表达载体pCI-neo-yieF及融合蛋白载体pEGFP-N1-yieF,用于转染HepG2细胞后的该基因的表达检测及示踪定位。将转染质粒pCI-neo-yieF的细胞在G418(400mg/ml)压力下筛选8周,获得了能稳定表达铬还原酶YieF的细胞株HepG2-YieF。通过MTT法分析,我们发现在5μMCr (VI)处理48h后,重组型HepG2-YieF细胞的存活率较野生型HepG2细胞提高了10%。在活性细胞和细胞粗提液还原Cr(Ⅵ)的实验中,HepG2-YieF细胞都表现出较HepG2细胞更强的还原能力。通过qRT-PCR检测到有Cr(VI)培养条件下,HepG2-TieF细胞中YieF的表达量较无铬培养条件下上调了3.89倍,因此推测该基因可能被环境中的Cr(Ⅵ)诱导表达,从而提高了细胞的Cr(Ⅵ)还原能力。在激光扫描共聚焦显微镜下观察瞬时转染质粒pEGFP-N1-yieF的HepG2细胞,发现融合蛋白YieF-EGFP在细胞核和细胞质中均有表达。本研究成功构建了细菌铬还原酶基因在哺乳动物细胞中表达的模型,也为转基因提高哺乳动物的铬耐受能力提供了一定的实验依据。
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