白扁豆非淀粉多糖的提取、理化性质及免疫活性的研究

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白扁豆是一种富含蛋白质、维生素以及矿物质的豆科类植物。随着社会经济的发展,人民对食物多样性的要求越来越高,各种豆类保健品、豆类营养品和豆类乳制品不断受到人民的青睐。近年来,从白扁豆成熟种子中获得一种活性组分-白扁豆多糖,研究发现该多糖可保护神经细胞,减少细胞凋亡,抑制脑的缺氧性损伤。本论文在前人的研究基础上优化了对白扁豆中多糖的提取:采用水提醇沉结合酶解法提取得到一种组分-白扁豆非淀粉多糖(Non-starch Polysaccharide from Dolichos lablab L,NS-DLP)。然后研究该多糖的基本理化性质,体内外抗氧化活性,以及抑菌活性;探讨NS-DLP对免疫低下小鼠的免疫调节作用以及该多糖对小鼠肠道菌群的影响。主要研究内容总结如下:(1)通过热水浸提法制备NS-DLP,采用离子色谱,红外光谱,扫描电镜等技术分析NS-DLP的理化性质和表观形貌;通过羟基自由基和DPPH自由基清除能力研究NS-DLP的体外抗氧化能力;采用抑菌圈法研究NS-DLP的抑菌性能。结果显示NS-DLP具有吡喃环结构,平均分子质量2.3×105 Da,其单糖组成由葡萄糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖组成,质量百分比(%)为23.23:6.2:5.09:2.76:2.4:0.48,电镜扫描结果显示该多糖表面微观形貌为片状。抗氧化实验表明NS-DLP对羟基自由基和DPPH具有一定清除作用,清除能力与浓度呈现明显的量效关系。抑菌实验结果显示NS-DLP在李斯特菌中体现出最明显的抑菌圈,抑菌圈直径达到11.23 mm,对大肠杆菌次之,抑菌圈直径为10.23 mm,表明NS-DLP对李斯特菌和大肠杆菌有一定的抑制能力。因此,NS-DLP具有一定的抗氧化和抑菌性能,可为白扁豆的深加工和进一步研究开发奠定理论基础。(2)建立环磷酰胺致免疫低下小鼠模型,研究NS-DLP的免疫调节活性。本实验对小鼠体重及胸腺、脾脏器官的变化进行记录;计算小鼠的器官指数。检测脾脏抗氧化酶:总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量来综合评价NS-DLP的免疫调节作用;使用免疫组织化学法(IHC)测量脾脏中CD3+、CD4+和CD20+细胞数量。结果显示:NS-DLP对免疫低下小鼠的体重有促进恢复作用,对小鼠的脾脏肿大也有相应的缓解作用;体内抗氧化数据显示NS-DLP能够改善CTX诱导的脾脏组织氧化损伤,相应的增强免疫低下小鼠的抗氧化能力。实验结果得出正常组小鼠的脾脏结构清晰,红髓和白髓能清楚分辨,模型组脾脏淤血肿大,纤维组织呈现增生现象,有镜面病变和颗粒脱离散乱现象,胞质里面颗粒减少,这可能是CTX对小鼠脾脏造成的损伤。而灌胃NS-DLP能改善CTX导致的脾脏增生现象,对脾脏有一定的保护作用。多糖组中CD4+T细胞和CD20+T细胞数量相较于模型组下降,而CD3+细胞数有增多的趋势,但无明显差异。这些现象表明CTX致免疫低下小鼠脾脏组织内产生了一些辅助T细胞,可能促进B淋巴细胞的分化和成熟,使其分泌过多物质,增强脾脏重量。(3)NS-DLP对环磷酰胺致免疫低下小鼠肠道的影响。围绕环磷酰胺致免疫低下小鼠的结肠内容物,分别研究了它的含水量、pH值、短链脂肪酸以及肠道菌群多样性分布情况。结果发现造模后老鼠内容物水分较高,这可能是由于环磷酰胺导致老鼠免疫力低下而产生的,而灌胃NS-DLP后这种现象有一定的改善作用;并且,pH测定发现NS-DLP灌胃后,CTX处理组小鼠pH含量有所降低,说明NS-DLP对小鼠肠道健康有积极作用,进一步SCFAs测定发现NS-DLP对小鼠肠内容物中SCFAs含量没有明显的改善作用;最后肠道菌群结果表明NS-DLP可以调节肠道菌群的比例。
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