论文部分内容阅读
癌症已经成为全世界人类的最大致死原因,乳腺癌是目前女性最常见的恶性肿瘤之一,发生于上皮组织,发病率位居女性恶性肿瘤之首,全世界数百万妇女遭受着乳腺癌的折磨。乳腺癌是高度异质性的疾病,不同分子亚型的乳腺癌,其临床表现、预后和治疗效果都不尽相同。三阴性乳腺癌(TNBC)是一类特殊的乳腺癌,其雌激素受体(ER),孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER-2)的表达阴性,同样也是一种分子异质性疾病。TNBC恶性程度高、易转移,加上缺乏针对性的治疗方案和特定的分子靶点,导致TNBC患者相比较其他亚型的乳腺癌患者,具有相对较差的预后和较高的死亡率。细胞间粘附分子1(ICAM-1)在乳腺癌进展和转移中起重要作用,其在TNBC细胞和组织中过表达,可能是TNBC诊断和治疗的潜在分子靶点。本研究以ICAM-1为研究对象,围绕如何针对TNBC中ICAM-1的活体无创检测,开展对ICAM-1具有靶向性的单克隆抗体放射性标记及生物评价研究。旨在制备一种新型的TNBC靶向的放射免疫探针,考察其在TNBC诊断与治疗的方面前景。在第二章中,我们对一系列人源乳腺癌细胞表面ICAM-1的表达进行了检测,流式细胞术结果显示,ICAM-1在非三阴性乳腺癌(non-TNBC)细胞(BT474和MCF-7)上表达阴性,在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞(MDA-MB-231和MDA-MB-453)上表达阳性,其阳性率显著高于non-TNBC细胞(BT474和MCF-7)(P<0.05)比non-TNBC细胞高出6-11倍。MDA-MB-231和MCF-7移植瘤组织免疫化学染色鉴定结果与细胞流式结果一致。在第三章中,我们对抗ICAM-1抗体进行了131I标记研究,成功制备稳定的131I-aICAM1探针,并对探针进行了一系列评价。131I-aICAMI的标记率>90%,放射化学纯度>99%,探针置于PBS和胎牛血清于室温条件下,放置2 d后放射化学纯度>80%,说明该标记物的体外稳定性较好。通过细胞饱和实验、细胞免疫荧光和组织放射自显影等手段对探针进行鉴定。该探针具有良好的免疫活性和特异性,能够和MDA-MB-231细胞上ICAM-1特异性结合且具有较高的亲和力(Kd =2.71 ± 0.20 nM)。在第四章中,我们对125I-aICAM1进行了体内SPECT显像研究。当抗体蛋白注射剂量为10 μg时,125I-aICAM1的体内SPECT显像效果最好。125I-aICAM1可以特异且有效地富集至MDA-MB-231移植瘤,显示出良好的肿瘤靶向性,其在正常器官快速清除并具有高的靶/非靶比值,在注射后48 h时,肿瘤清晰可见,随着时间的推移,肿瘤积累量增加。在注射后1、24、48、72和96 h时,肿瘤部位的摄取分别为 3.09 ± 0.09%ID/g、7.02 ± 0.99%ID/g、8.87 ± 0.92%ID/g、11.79 ± 2.15%ID/g 和 15.10 ± 1.40%ID/g。96 h 时肿瘤部位的摄取效果最佳,此时肿瘤/心脏、肿瘤/肝脏和肿瘤/肌肉比值分别为3.66 土 0.34、5.36± 0.50和29.70 ± 2.76。而作为对比的125I-mIgG,在注射后的所有时间点几乎没有观察到MDA-MB-231肿瘤的摄取。在第五章中,我们进行了放射免疫治疗研究,131I-aICAM1可以显著抑制MDA-MB-231肿瘤的生长。125I-aICAM1是使用SPECT检测体内ICAM-1表达的新型的强有力的示踪剂,该探针有望对乳腺癌的分子分型研究提供信息,进行三阴性乳腺癌非侵入性SPECT成像并同步指导131I-aICAM1放射免疫治疗。