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磺胺类药物（Sulfonamides,SAs）是以对氨基苯磺酰胺为基本结构的人工合成抗菌药,因其具有显著的广谱抗菌作用而被普遍应用于水产养殖中治疗疾病。近年来,磺胺类药物残留所引起的环境污染以及食品安全问题日益受到关注。磺胺类药物是水产品质量安全监控的重点项目,根据农业农村部、国家市场监管总局等发布的水产品监督抽检通告显示,水产品中磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole,SMZ）、磺胺二甲异噁唑（Sulfaisoxazole,SFZ）、磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine,SM2）、磺胺甲基嘧啶（sulfamerazine,SM1）仍有被检出的情况,能够准确测定水产品中磺胺类药物残留是保障水产品质量安全的重点。标准样品是实验室开展药物残留检测分析中进行质量控制的工具,可用来校准检测仪器,并在分析实验中有效消除水产品基质效应对检测结果带来的干扰,提高了水产品中药物残留检测的准确性与溯源性。国家标准样品管理平台中以水产品为基质制备的包含多种磺胺类药物残留的标准样品成果有限,难以满足实际应用需求。基于此,为确保水产品中磺胺类药物监测结果的准确可靠与可溯源,需研制相应标准样品,本研究以草鱼为研究对象,研究了包含SMZ、SFZ、SM2、SM14种磺胺类药物残留的基体标准样品制备方法,研究内容主要包含以下三个部分:1.通过对仪器检测条件、样品提取及净化条件进行优化,建立了草鱼粉中4种磺胺类药物残留的检测方法—液相色谱-串联质谱法。草鱼粉样品经0.1%甲酸乙腈超声提取,冷冻离心后,上清液旋蒸浓缩,复溶后使用25 mg C18与25 mg PSA混合净化剂对复溶液进行净化。采用C18色谱柱分离,5.0 mmol/L醋酸铵水溶液（含0.1%甲酸）和甲醇为流动相对4种磺胺类化合物进行梯度洗脱,内标法定量。结果表明:SMZ、SFZ、SM2、SM1在10～200 ng/m L范围内,相关系数分别为0.9981、0.9989、0.9999、0.9999。SMZ、SFZ、SM2、SM1方法的检出限均为0.5μg/kg,定量限分别为1.0、1.5、1.0、1.0μg/kg。当空白草鱼粉中4种磺胺类药物加标水平为10、20、50μg/kg时,SMZ、SFZ、SM2、SM1的回收率为92.90%～102.84%,相对标准偏差为1.70%～9.83%。该方法灵敏度高,结果可靠,精密度好,能够满足草鱼粉样品中SMZ、SFZ、SM2、SM1的检测要求,为后期草鱼粉中基体标准样品中SMZ、SFZ、SM2、SM1的检测奠定了方法基础。2.通过在养殖池中开展草鱼药浴实验,研究了获得阳性草鱼样品所需的养殖条件,建立了草鱼肌肉中磺胺类药物的残留量与初始药浴浓度的关系式。阳性样品根据自然污染的获取原则,通过对草鱼药浴,研究了草鱼肌肉中SMZ、SFZ、SM2、SM1残留量与养殖环境水温、不同药浴时间、个体规格大小的关系。结果表明:在（15±2）℃条件下,草鱼对SMZ、SFZ、SM2、SM1的吸收代谢水平显著低于（23±2）℃。在温度为（23±2）℃时,草鱼状态良好,草鱼对SMZ、SFZ、SM2、SM1的吸收水平呈缓慢上升的趋势。最终确定阳性样品的养殖条件为:水温为（23±2）℃,药浴时间为10 h,鱼体规格在（1000±100）g。SMZ、SFZ、SM2、SM1初始药浴浓度x1为2.72、3.75、1.05、2.49 mg/L,药浴10 h后,检测到草鱼肌肉中的含量y1分别为12.59、17.45、16.88、17.22μg/kg。因此,确定草鱼肌肉中SMZ、SFZ、SM2、SM1的含量y与初始药浴浓度x的关系式分别为y=4.63 x;y=4.65 x;y=16.08 x;y=6.92 x。以草鱼肌肉中预期目标含量y2为5μg/kg,得到初始药浴浓度x2分别为1.08、1.08、0.31、0.72 mg/L,对y与x关系式进行6次药浴验证。检验结果显示,4种磺胺类药物含量检测值的单样本t检验的P值均大于0.05,表明该含量检测值与预期目标含量不存在显著性差异,关系式的可行性得以验证。3.通过设定预期目标含量,研制了一批草鱼粉中SMZ、SFZ、SM2、SM1药物残留基体标准样品。根据确定的初始药浴浓度对草鱼进行药浴,经过均质混匀、冷冻干燥、粉碎过筛、二次混匀、分装后获得草鱼粉基体标准样品候选物。以液相色谱-串联质谱法对获得的草鱼粉基体标准样品进行标准样品研制的相关检测。采用抽样的方式检测标准样品的均匀性,均匀性统计结果以单因素方差检验法进行分析。草鱼粉样品的稳定性采用t检验法进行判断,通过模拟样品运输环境,对样品中SMZ、SFZ、SM2、SM1进行稳定性检验;以﹣20℃为SMZ、SFZ、SM2、SM1样品的长期储存温度,对样品进行长期稳定性考察,以评估草鱼粉药物残留基体标准样品的有效期。采用联合定值的方式对草鱼粉基体标准样品的特性量进行确定,与6家通过资质认定的实验室共同完成定值结果。结果表明:制备的草鱼粉标准样品均匀性检验结果良好,在﹣20℃下保存6个月稳定性良好,在50℃下储存15天量值仍稳定可靠,SMZ、SFZ、SM2、SM1样品可常温运输,该制备方法可为水产品基质中磺胺类药物残留基体标准样品的制备提供技术参考。最终对草鱼粉中4种磺胺类药物残留基体标准样品进行准确定值并评估其不确定度,草鱼粉中SMZ、SFZ、SM2、SM1的量值结果分别为22.22±7.75、24.04±8.40、31.11±5.84、28.55±7.18μg/kg。