反应调节因子(response regulator,RR)为His→Asp磷酸转移系统或双组分信号转导系统的下游组成成分。植物RR广泛影响植物的生长、发育和胁迫反应过程。为了研究RR基因在世界上重要的切花—文心兰(Oncidium)花瓣发育和衰老过程中的作用,本文通过RACE技术克隆文心兰基因OnRR9和OnRR10,同时利用Walking技术获得基因启动子序列,通过生物信息学、表达分析及遗传转化来研究其基因功能,主要结果如下:(1)生物信息学分析发现,OnRR9和OnRR10全长分别为627 bp和630 bp,编码208、209个氨基酸大小的蛋白质。同源序列比对及系统进化分析显示,OnRR9和OnRR10属于YesN家族,兰科中,OnRR9蛋白与铁皮石斛ORR9亲缘关系较近,OnRR10蛋白与小兰屿蝴蝶兰ORR10亲缘关系最近。利用软件分析启动子序列,OnRR9和OnRR10启动子序列分别为597 bp和733 bp,均含有启动子核心序列、增强子元件、光响应元件、参与赤霉素反应性的顺式元件等。(2)实时荧光定量分析表明,OnRR9基因在盛开期前后表达模式发生逆转,表明它可能参与文心兰花瓣衰老启动过程的调控。OnRR10基因在A时期(花苞期)和F(衰老早期)表达量最高,可能在文心兰开放及花瓣衰老早期起作用;两基因表达与生物钟无关;受光照影响,OnRR9基因全黑暗下表达量最高,OnRR10基因在全光照表达量较高;在外源6-BA刺激下,两基因表达量在均在短时间内极速上升。(3)对拟南芥中过表达OnRR10基因进行功能鉴定,结果表明:OnRR10转基因拟南芥植株下胚轴伸长受短日照红光抑制;在低温处理后OnRR10基因表达量下降,后期有所回升;外源6-BA处理下,OnRR10基因表达量在3小时内大幅上升;与野生型拟南芥相比,OnRR10转基因拟南芥开花更早,衰老更快,表明OnRR10基因在开花和衰老调控中发挥作用。构建启动子过表达载体转化拟南芥,对OnRR10启动子转基因拟南芥研究表明,该段启动子在叶、胚轴、根、种子等组织均有活性;在一定时间内,GA和MeJA可上调该段启动子转录活性,6-BA则下调该启动子活性。(4)通过农杆菌侵染类原球茎对OnRRs基因的文心兰遗传转化进行了研究。发现头孢霉素最适选择浓度浓度为600 mg/L,转化筛选的卡那最适浓度为250 mg/L。成功地获得了OnRR9和OnRR10的文心兰转基因类原球茎。