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[目的]本研究拟通过体外细胞实验探明coronin3表达量的变化,对U87胶质瘤细胞运动能力的影响。[方法]①p EGFP/coronin3真核过表达载体的构建及鉴定:在无菌、无RNA酶污染的条件下利用RNA提取试剂盒提取出U87胶质瘤细胞的总RNA。利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出coronin3基因的片段,琼脂糖凝胶电泳分析结束后回收纯化PCR产物,提取大肠杆菌质粒,琼脂糖凝胶电泳回收产物与空白质粒pEGFP-N2,将目的基因与质粒同时进行XhoI和BamhI双酶切,两种酶切产物经solution I连接酶作用后,转化入感受态大肠杆菌DH5α,LB琼脂平板培养过夜。经菌落PCR初筛,阳性克隆提取质粒后送昆明硕擎生物技术服务有限公司碱基测序,将碱基测序结果报告与ncbi.Blast软件进行同源性对比分析。②U87细胞的转染和重组基因p EGFP/coronin 3蛋白以及GFP的表达及检测:取纯化的重组质粒p EGFP/coronin 3和空质粒GFP,在脂质体试剂viafect的作用下转染U87细胞。转染24 h后收集细胞,Western blot鉴定重组coronin 3蛋白在U87细胞中的表达情况。③将含有重组质粒p EGFP/coronin 3的U87细胞株与含有空质粒GFP的U87细胞株以及野生型U87细胞株进行细胞划痕迁移实验和小室细胞迁移实验,通过两两的组间比较,探明coronin 3表达量的变化对U87细胞的运动能力的影响。[结果]①反转录聚合酶链反应成功获得U87细胞的cDNA。随机挑选4个重组基因表达载体的单克隆菌落,行菌落聚合酶链反应检筛出阳性克隆3个,经碱基测序及ncbi.Blast软件结果分析,重组质粒构建成功。②脂质体转染U87细胞24 h后,免疫荧光及Western blot鉴定重组coronin 3蛋白在U87细胞中的表达,在85kDa处出现阳性条带。③细胞划痕实验,重组质粒组,空质粒组和无处理组三个小组,重组质粒组细胞24h后细胞迁移距离(29.85±2.28)空质粒组24h后细胞迁移距离(16.11±1.80),无处理组24h后细胞迁移距离(14.76±1.80),每两组之间相互对照,重组质粒组和空质粒组,以及重组质粒组与无处理组之间,P<0,差异有统计学意义。空质粒组与无处理组之间,P>0.05,差异没有统计学意义。重组质粒组穿过小室膜的细胞数为(93.60±9.02)而空质粒组细胞穿过小室膜的细胞数(55.20±5.20)未处理组细胞穿过小室膜的细胞数为(51.70±7.28),三组之间两两比较,重组质粒组和空质粒组,以及重组质粒组与无处理组之间,P<0.01差异有统计学意义,空质粒组与无处理组比较,P>0.05,差异无统计学意义。即重组质粒组的细胞相较于空质粒组和无处理组,其细胞迁移运动能力有了明显的提升。[结论]①U87重组p EGFP/coronin 3基因的真核表达载体p EGFP/coronin 3构建成功,瞬时转染U87细胞后能够表达重组coronin 3蛋白。②coronin 3在细胞中的表达量升高后可促进U87胶质细胞瘤的迁移运动能力。