金属螯合亲和反胶团的制备与应用初探

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反胶团萃取技术在生物活性物质如蛋白质的分离领域被广泛的应用与研究。但传统的离子型反胶团在萃取过程中往往对蛋白质选择性低,并且与蛋白质之间作用力过强而使蛋白质失活。带有色素亲和配基(辛巴蓝,CB)的非离子型反胶团解决了蛋白质与反胶团作用力过强而变性的问题,但是对离子强度和高浓度的变性剂耐受力差。因此本文研制出新型金属螯合亲和非离子反胶团系统,并对影响此反胶团系统的条件如pH,离子强度等进行了分析研究。最后,利用此反胶团对蛋白质萃取进行了初步的探索。通过双液相合成的方法将非离子型表面活性剂(Span85)分子结合螯合剂TED(三羧甲基乙二胺),通过螯合作用连接金属配基(Cu2+),并以正己烷为溶剂制备出Span85-TED-Cu金属螯合亲和反胶团。利用水份测定仪和粒径测定仪对亲和反胶团的性质进行了研究。结果表明,随着金属配基Cu2+的引入,Span85-TED-Cu反胶团的含水率(W0),反胶团粒径(Z-average size)均比Span85反胶团有显著的提高。Span85-TED-Cu反胶团能够在较宽的pH范围(5~9),较大的离子强度(0.5mol/L)以及高浓度的变性剂(8mol/L Urea)条件下保持含水率不变。对Span85-TED-Cu反胶团萃取蛋白质进行初探。研究表明,反胶团萃取蛋白质受到表面活性剂浓度、金属配基浓度以及助剂(醇)的影响,但可耐受宽pH范围、较高离子强度以及高浓度的变性剂。萃取牛血红蛋白(BH)时,萃取率E达到70%。助剂的加入可以增加反胶团对蛋白质的萃取率,但会影响蛋白质在反胶团相的稳定存在,使蛋白质沉积于相界面,不利于蛋白质的复性。
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