绿茶儿茶素对诱发肿瘤的化学预防作用及其机理初探

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目的:当今抗肿瘤的研究热点越来越倾向于减少或延迟肿瘤的发生。天然饮食中有某些物质人们长期食用,而无毒作用,并具有多种药理学功效,它们是否能够用于预防癌症,日益为人们所关注。绿茶儿茶素(Green Tea Catechin,GTC)是茶叶多酚类物质的主要成分,主要有表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC),表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等,其中EGCG约占GTC总量的50%左右。经国内外研究与临床应用发现GTC有多种药理学作用,如抗氧化、抗衰老、抗炎、抗菌、抗病毒、调节机体免疫力、降血糖和降血脂等。迄今,许多国家对茶叶的防癌作用进行了广泛的研究,但结论并不完全一致。关于茶抗癌的作用机制,也尚未明确。本文在以往研究的基础上,观察了化学致癌物DMBA诱发大鼠乳腺癌过程中,GTC对大鼠生化、免疫、抗氧化系统、肿瘤相关基因表达以及细胞凋亡等方面的影响,旨在探讨GTC在肿瘤化学预防方面作用的可能机理及应用前景。 方法:4w龄SD大鼠,按体重随机分为对照组(Control)、二甲基苯蒽模型组(DMBA组)、儿茶素组(GTC组)、二甲基苯蒽+儿茶素组(DMBA+GTC组),各组均食用高脂饲料。DMBA组和DMBA+GTC组于动物6w龄时灌胃给予DMBA(7mg/100g·bw),GTC组和DMBA+GTC组每日灌胃给予1ml GTC水溶液(含GTC 80mg),至实验结束,共观察20w。给予DMBA 5w后,每周触摸皮下肿瘤,纪录肿瘤发生的时间、大小、数量。选择不同时点(给药后4、8、12、16、20w末)分五批处死动物,称取动物脾脏和胸腺的重量,并取乳腺组织送做病理,观察乳腺的组织学变化。于实验中期(8w末)和实验末(20w末)测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-CHO)等指标。4w末时计数胸骨骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核率。16w末时进行巨噬细胞(MΦ)吞噬功能测定,T淋巴细胞增殖功能、NK细胞活性在试验末时检测。取第五批(20w末)动物DMBA和DMBA+GTC组的乳腺组织作病理切片,用HistostainTM-SP(链霉卵白素-辣根过氧化物酶)免疫组化检测试剂盒观察乳腺导管上皮细胞中Bcl-2、Bax、P16等肿瘤相关基因的蛋白表达。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(Terminal Ahstr.ct in Chioese deox叨ucleotldyl transfe刚e-mediated dUP nick end-labing,TmEL)$4定孪L腺 导管上皮细胞的凋亡指数(Apoptosis Index,AI),并用 CMIAS真彩色医学 图像分析系统检测凋亡细胞的光密度。 结果:1.肿瘤发生情况 实验过程中,DMBA组两只大鼠,DMBA+GTC组一 只大鼠可们及皮下肿瘤,Control、GTC组均未触及。乳腺组织病理结果显示,间 4W末 DMBA组芽体的出现率高于 DMBA+GTC组(P<0刀5),8、12、16w 末*MB A组芽体和实团两种增生形态出现率均高于****+**C组u<队05), 20W末DMBA组芽体和实团的出现率高于其它各组(P<0刀5),DMBA组乳 头的出现率高于DMBA+GTC组和GTC组,而与Co血rol组无差别,核分裂只 在C。lr。l和DMBA组间有差异,DMBA组高于C。ltr。l组(P<0刀5)。2.抗 突变结果 DMBA组微核率高于其余各组(P<0.05);DMBA+GTC组低于 DMBA组,但仍高于其它两组(P<0刀5);GTC组和C。fitrol间未见显著性差 异。3.血脂测定结果sw末GTC组和DMBA组血清TG含量低于Control组, 差别有显著性,至20w末各组间血清TG含量差别无显著性。在实验中期及实 验末,各组血清TC、HDL含量均无统计学上的差别。4.抗氧化指标测定结果SW 末GTC组血清MDA含量均低于C。Iltrol和DMBA组,差别有显著性。至20W 末各组间差别无统计学意义。在实验中期及实验末,各组SOD、GSH.PX均无 显著性差异。5.免疫指标测定结果DMBA+GTC组巨噬细胞吞噬功能高于其 它各组(P<0.05),差别有显著性。DMBA-GTC组 T淋巴细胞增殖能力高于 其它各组(P<0刀5),DMBA和 GTC组间未见显著性差异,COOtfol组最低 (P<0刀引。****斗**C组*K细胞活性高于其它各组(P<O刀5),**C组 次之,与Control和DMBA组有差别(P<0刀5),DMBA与Control组间无差 别。6.乳腺导管上皮细胞肿瘤相关基因的蛋白表达B。l-2的表达在DMBA和 DMBA+GTC组间无显著性差异,但DMBA+GTC组Bax的表达高于DMBA 组,二者的比值也有统计学上的差别(P<0.05)。P16蛋白在DMBA+GTC组 高于OMBA组(P<0刀5)。7.乳腺导管上皮细胞凋亡测定结果0**A和 DMBA+GTC组间AI和平均光密度值均未见?
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