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研究背景及目的:白色念珠菌（Candida albicans,CA）作为一种条件性致病真菌,在人类或其他哺乳动物的胃肠道、泌尿道、口腔、皮肤和女性或雌性哺乳动物生殖道黏膜普遍存在。当机体正气充足,免疫功能正常情况下,白色念珠菌与机体正常菌群处于和平共生状态,通常以数量较少的无害共生酵母形式存在,并且受到人体正常菌群的竞争性抑制和机体免疫的生理性抑制,在这种情况下,白色念珠菌通常不会引起机体感染和病理变化的产生。但是当人体正气不足或免疫功能低下及缺失、环境应激、正常菌群或其他因素发生改变时,可导致白念珠菌从共生状态转变为感染状态,从而造成一系列人体浅表性感染,如鹅口疮和阴道念珠菌病等,甚至会造成危及生命的系统性念珠菌疾病,如真菌败血症。在临床上,若艾滋病、器官移植、恶性肿等免疫缺陷病人或者烧伤以及外伤等感染白念株菌,则其死亡风险会骤然升高。然而目前治疗手段有限,所以迫切需要寻找更好更安全的治疗药物及手段。因此本实验旨在初步探究活体五谷虫分泌物/排泄物（ES）对白色念珠菌的抗菌活性及其机制,为寻找真菌治疗新手段提供依据。方法:参照Jia等实验方法,通过微量稀释测定法测定ES对白色念珠菌的最小抑菌浓度;分别检测并记录0 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h以及12 h ES处理白念菌后的OD600值,以观察其动态抗菌能力;通过结晶紫染色法观察细胞壁完整性、参照Dang等方法观察细胞膜通透性、采用扫描电镜观察真菌细胞整体外形变化情况及细胞间粘附情况;透射电镜观察单个或多个真菌细胞内部结构及形态变化。利用实时荧光定量PCR（Reverse transcription quantitative PCR,RT-q PCR）技术对ES处理前后白色念珠菌细胞壁合成相关基因（GSL1、GSL2）;细胞膜麦角固醇合成相关基因（ERG1、ERG5、ERG11）的表达水平进行检测,以ES探究白念菌的机理;从抑制白念珠菌初始粘附、抑制其生物膜的形成及破坏已形成的生物膜三个方面分析ES对白色念珠菌生物膜的影响。结果:（1）五谷虫分泌物/排泄物（ES）对白色念珠菌的最小抑菌浓度为220 mg/m L,两性霉素B和EDTA分别为5 mg/m L、65 mg/m L。与EDTA相比,ES表现出了较强的抗菌活性。（2）与对照组相比,五谷虫分泌物/排泄物（ES）处理组有较好的动态抗菌能力,且在浓度达到2 MIC时对于白色念珠菌有着较强的抑菌能力。（3）灭菌水处理后的细胞壁完整性约为96.78%,ES处理后的细胞壁完整性约为40.76%,两性霉素B处理后的细胞壁完整性约为5.34%,后两组细胞壁完整性显著低于灭菌水处理组（P＜0.05）,且两性霉素B组显著低于ES处理组（P＜0.05）。灭菌水组白念成活细胞数较多,形态正常,呈圆形或椭圆形,细胞膜以及胞质被染成淡紫色或无色,细胞壁结构完整。ES处理组可见白念成活细胞数较灭菌水组明显减少,且大部分白念细胞壁及细胞质被染成深紫色。两性霉素B处理组可见白念成活细胞数寥寥无几,较灭菌水处理组及ES处理组均明显减少,且绝大部分菌体被染成深紫色,白念细胞壁破坏严重。（4）ES处理组及两性霉素B均可以在短时间内增加白念细胞膜的通透性,且ES处理组优于两性霉素B。而EDTA处理对白色念珠菌细胞膜通透性的影响不显著,但高于灭菌水处理组、低于ES处理组及两性霉素B处理组。（5）扫描电镜观察示:对照组白念细胞呈现正常椭圆形生理形态,菌体饱满,表面光滑,细胞膜无破解、脱落等情况,实验组白念细胞形态不规则,细胞表面皱缩,较对照组有明显差别,且细胞间彼此紧密粘附,以及出现细胞表面凹陷,甚至出现细胞膜破裂、穿孔、脱落以及内容物外泄等现象;透射电镜示:对照组白色念珠菌细胞形态规整,呈圆形或椭圆形,细胞结构完整,细胞膜无破溃,内部结构排列整齐有序。实验组白念菌细胞形成细胞质液泡、电子密度不均匀以及细胞膜破坏等现象。（6）RT-q PCR示:白色念珠菌细胞壁合成相关基因GSL1、GSL2经ES处理后,与对照组相比均显著上调（p＜0.0001）;经两性霉素B处理后同样显著上调（p＜0.0001）,且ES组优于AMB组。细胞膜麦角固醇合成相关基因ERG1经ES处理后,与对照组相比显著上调（p＜0.0001）;细胞膜麦角固醇合成相关基因（ERG1、ERG5、ERG11）均上调,各组间差异明显;（7）ES对于抑制白念珠菌初始粘附、抑制其生物膜的形成及破坏已形成的生物膜三方面均有一定的作用。结论:（1）ES对于白色念珠菌的最小抑菌浓度为220 mg/m L,两性霉素B和EDTA分别为5 mg/m L、65 mg/m L。与EDTA相比,ES表现出了较强的抗菌活性,在浓度达到2 MIC时对于白色念珠菌有着较强的抑菌能力。（2）ES和两性霉素B都有着较强的破坏白念细胞壁和细胞膜的能力,从而影响白色念珠菌细胞的正常生理功能,达到降低或破坏其生长、致病的可能,其机制可能与ES影响白色念珠菌细胞壁合成相关基因（GSL1、GSL2）;细胞膜麦角固醇合成相关基因（ERG1、ERG5、ERG11）的表达水平有关。（3）ES对于抑制白念珠菌初始粘附、抑制其生物膜的形成及破坏已形成的生物膜均有一定的作用。