【摘 要】
：
山羊精子液态保存具有操作简便、运输方便、无冷冻保存对精子的损伤等优点,但存在精子活力和寿命下降迅速的局限,极大限制了该技术的应用和推广。研究发现自噬可能是导致精子质量下降的关键因素之一,目前有关山羊精子自噬机理研究鲜有报道。为了探究4℃液态保存中奶山羊精子自噬的细胞分子机理,为液态保存稀释液配方的研制提供理论基础和思路。本研究对4℃液态保存中关中奶山羊精子质量与自噬水平的变化进行观察,进而筛选分析
【基金项目】
：
国家自然科学基金（编号:31902223）；
论文部分内容阅读
山羊精子液态保存具有操作简便、运输方便、无冷冻保存对精子的损伤等优点,但存在精子活力和寿命下降迅速的局限,极大限制了该技术的应用和推广。研究发现自噬可能是导致精子质量下降的关键因素之一,目前有关山羊精子自噬机理研究鲜有报道。为了探究4℃液态保存中奶山羊精子自噬的细胞分子机理,为液态保存稀释液配方的研制提供理论基础和思路。本研究对4℃液态保存中关中奶山羊精子质量与自噬水平的变化进行观察,进而筛选分析在此变化过程中参与自噬的相关蛋白与通路,最后对关键自噬蛋白在不同保存时间精子的分布表达情况进行验证。获得如下主要研究结果:1.4℃液态保存中奶山羊精子质量变化分别在0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120h和144 h检测4℃液态保存中精子的运动性、活率及结构变化。结果显示,随着保存时间延长,奶山羊精子运动性与活率逐渐降低,48 h、96 h时精子运动性与活率下降显著。超微结构显示,保存至48 h时,部分精子出现核膜膨胀折叠、线粒体肿胀、缺失等结构损伤;保存至96 h时,部分精子出现核崩解碎裂,线粒体排列混乱、缺失和位置异常等结构损伤;值得注意的是,部分精子头部和尾部出现大量囊性空泡,具有典型的自噬体双层膜结构特征。提示4℃液态保存中奶山羊精子发生自噬性死亡。2.4℃液态保存中奶山羊精子自噬相关蛋白筛选与分析TMT定量蛋白组学技术筛选分析4℃液态保存至0 h（A）、48 h（B）和96 h（C）的奶山羊精子差异表达蛋白（DEPs）,在B/A、C/A和C/B 3个比较组中,鉴定到PKA、MAP1LC3B和ATG5等多个自噬相关DEPs可能参与自噬调控过程,同时KEGG富集分析显示MAPK信号通路显著富集表达。提示4℃液态保存中PKA、MAP1LC3B、ATG5等自噬相关蛋白以及MAPK信号通路可能参与调控奶山羊精子自噬性死亡过程。3.4℃液态保存中奶山羊精子自噬关键蛋白的表达分布利用免疫荧光和Western Blot技术检测精子自噬关键蛋白LC3B、ATG5和P62的表达分布特征。结果显示,LC3B主要在精子头部呈弥散型分布,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值随保存时间的延长显著升高（P<0.05）;ATG5仅在精子头部呈弥散型分布,保存至96 h时,ATG5表达量显著增加（P<0.05）;P62主要在精子尾部中段呈点状分布,保存至96 h时,P62表达量明显降低（P<0.05）。验证了自噬关键蛋白参与调控4℃液态保存中奶山羊精子自噬性死亡过程。以上结果表明,在4℃液态保存中,奶山羊精子质量下降与自噬密切相关且自噬水平随保存时间延长而升高,PKA等多个自噬相关DEPs可能参与调控精子自噬性死亡过程。
其他文献
肠道是重要的消化器官,同时也是机体最大的免疫器官,肠道屏障的完整与免疫功能的健全是机体健康的保障。枯草芽孢杆菌是一种有益菌,目前的研究主要集中在其促生长方面,虽也有关于其在维持肠道屏障与抑制炎症方面的报道,但枯草芽孢杆菌影响肠道屏障与免疫的机制尚不清楚。枯草芽孢杆菌的剂量和肉鸡的日龄是否会对枯草芽孢杆菌的效果造成影响也未见报道。本研究通过在日粮中添加不同剂量的枯草芽孢杆菌以及在不同时间采样,研究枯
睾丸是精子发生的场所,哺乳动物的睾丸位于体腔外的阴囊中,成年哺乳动物包括人类,睾丸的正常温度均比身体核心温度要低。阴囊局部高温是目前世界卫生组织公认的严重损伤雄性生育的重要因素,温度过高会引起热应激（heat stress）,影响睾丸的生精过程,降低精子的质量和数量,甚至导致不育。目前热应激引起的种畜精子发生异常、繁殖性能下降是畜牧生产中普遍存在并亟待解决的重要问题。内质网在许多细胞的生物发生过程
头孢噻呋是第3代动物专用头孢类抗生素,其抗菌谱广,具有抗菌活性强、给药后吸收快、生物利用度高及生物半衰期长等特点,被广泛用于奶牛乳房炎的治疗。本研究旨在研制抑菌作用强、包封率高、安全稳定的头孢噻呋钠纳米脂质体,并对其进行质量评价、安全性评价和药效学初步评价,为临床治疗奶牛乳房炎提供理论依据。1.头孢噻呋钠纳米脂质体制备工艺的研究利用紫外分光光度法测定头孢噻呋钠纳米脂质体含量,超滤离心法测定头孢噻呋
共价有机框架（Covalent Organic Frameworks,COFs）是由轻质元素（B,C,N,O,H）通过牢固的共价键连接而形成的一类新兴的多孔共价有机聚合物,具有高孔隙率,定义明确的孔径,有序通道结构,较大的比表面积,高稳定性和多维性等显著的特点,在化学传感,气体存储和分离,催化,光电器件,小分子吸附和药物传递等领域得到越来越广泛的应用。本论文针对性地选择含有四个官能团且具有大共轭π
力致发光是指材料受摩擦、刮划、挤压、撞击、拉伸、压缩等机械刺激所表现出来的一种发光现象。由于力致发光直接建立了力学参数与发光信号之间的关联,其在可视化力学传感方面展现出了独特的优势,基于力致发光的可视化力学传感在结构健康监测、生物力学监测、人机交互等领域具有广阔的应用前景。然而,目前已报道的力致发光材料总体上存在着发光颜色单一、发光效率不足以及发光瞬态性等问题,因此,亟需发展新型、高性能力致发光材
饲料中的霉菌毒素污染不仅给畜牧业带来巨大的经济损失,而且由于食物链的累积作用,对人类健康造成严重威胁。赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）是一种由真菌产生的真菌毒素,广泛存在于谷物中,OTA会对肾脏、肝脏、中枢神经和免疫系统造成有害影响。然而,OTA如何影响哺乳动物卵母细胞质量的机制仍不明确。在本研究中,通过向小鼠卵母细胞体外成熟液中添加7.5μM的OTA,暴露16小时,统计卵母细胞体
社区发现是一个基础性的且被广泛研究的问题。现有的社区发现算法多是聚焦于网络拓扑,然而随着真实世界网络中实体可用属性的多样性增加,捕获网络结构和属性的丰富交互关系来进行社区发现变得十分重要。通过对现有社区发现方法现状进行总结与分析,本文主要在融合结构和属性视图的可重叠社区发现和基于染色随机游走的可重叠社区发现两个方面展开了深入的研究,并取得了如下研究成果:1.提出了融合结构和属性视图的可重叠社区发现
猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是一种自主复制型单股负链DNA病毒,其复制完全依赖于宿主细胞的复制酶系统。PPV基因组主要包含两个开放性阅读框（Open reading frame,ORFs）ORF1和ORF2,ORF1编码非结构蛋白NS1、NS2和NS3,ORF2编码结构蛋白VP1和VP2。其中,VP2是病毒最重要的结构蛋白,占病毒衣壳组分的90%以上,是PPV最主要的
二炔（DA）单体在254 nm紫外光照射下或者γ射线和X射线下进行聚合可得到聚二炔（PDA）,PDA具有独特的光学特性。即在外界环境的刺激下（热、溶剂、机械应力、p H、金属离子、微生物等）,自身的颜色可由蓝色变为红色,相应蓝色对应的紫外可见吸收峰由原本的640 nm左右蓝移至540 nm左右。PDA具有的光学特性使其可作为传感器使用,但当撤销刺激后,它的颜色不能返回至原始的蓝色,如作为传感器不能
荧光传感方法具有灵敏度高、选择性好、操作简单、检测实时、可移植性好等优点,在生命科学、医学成像、生物传感分析等众多领域中得到了广泛的应用。其中,比率荧光传感通过同时测量不同波长的两个或两个以上的荧光信号,然后计算它们的强度比,实现对目标物的分析。与传统荧光方法相比,比率荧光传感通过内参比的建立极大地降低了探针浓度、温度、溶剂极性、激发波长、环境p H等众多难以控制因素对分析传感的干扰,使得检测结果