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目的:观察温肾养肝方治疗帕金森病(PD)的临床疗效,从脑-肠相关性探讨其治疗帕金森病的作用机理;探讨帕金森病患者与健康人群肠道菌群结构组成差别,观察肠道菌群丰度在温肾养肝方治疗前后的改变,研究温肾养肝方对肠道菌群的作用机制;探讨温肾养肝方改善鱼藤酮诱导慢性帕金森病小鼠相关症状及肠道菌群的影响。方法:研究一:临床研究采取随机、安慰剂对照方法,对温肾养肝方治疗41例帕金森病患者的安全有效性评估,治疗组20例,对照组21例。治疗组原有治疗方案加温肾养肝方,对照组原有治疗方案加安慰剂颗粒。8周治疗疗程后行疗效性指标观察:统一帕金森病评定量表(UPDRS评分)、非运动症状评估、胃肠道症状(NMSS评分)、帕金森病患者生活质量问卷39项(PDQ-39)评分,左旋多巴等效剂量(LDE)、中医证候积分和便秘症状评分;测定实验室指标:血浆脑肠肽胆囊收缩素、血管活性肠肽水平。研究二:采取随机、对照临床试验,收集来自于南京市中医院的35名受试者,其中PD组20人、健康者15人。收集粪便样本,提取标本细菌DNA、对细菌16SrDNA的V3-V4序列进行扩增,对PD组与健康人群肠道菌群差异进行比较。PD组随机分为治疗组(基础治疗加温肾养肝方)10人,对照组(基础治疗加安慰剂)10人,治疗8周后比较两组患者治疗前后肠道菌群差异。研究三:选用10月龄健康C57BL/6小鼠,动物随机分为空白组(Saline)、模型组(Model)、温肾养肝方高(Wsyg-H)、中(Wsyg-M)、低(Wsyg-L)剂量组、阳性药物对照组(Sinemet),每组5只。建立鱼藤酮慢性PD模型,以息宁为阳性药物参照,来研究温肾养肝方高、中、低剂量对PD模型小鼠的神经保护作用。通过温肾养肝方治疗,对小鼠回盲部粪便标本中的细菌16SrRNAV3-V4区域扩增子测序,比较PD模型小鼠肠道菌群特点及温肾养肝方干预后肠道菌群变化。结果:1.温肾养肝方治疗帕金森病的临床总有效率75.00%,疗效优于对照组。治疗组UPDRS评分、PDQ-39评分、NMSS评分、非运动症状-胃肠道评分较对照组下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),治疗组中医证候积分、便秘症状评分较对照组下降(P<0.01,P<0.01),治疗组脑肠肽指标CCK、VIP水平较对照组下降(P<0.01,P<0.01)。2.帕金森患者与健康人群肠道菌群存在差异:粪球菌、瘤胃球菌、乳杆菌、双歧杆菌类、毛螺菌较健康人群明显减少;杆菌、肠球菌、变形杆菌、克雷伯菌属在帕金森病患者中丰度较高。经温肾养肝方治疗后,帕金森病患者乳酸乳球菌、毛螺菌科、普雷沃氏菌丰度上升,绿弯菌门丰度较前下降。3.温肾养肝方高、中、低剂量能够缩短慢性PD模型小鼠爬杆实验的转头时间(P<0.01,P<0.01,P<0.05),温肾养肝方高、中剂量能够缩短PD模型小鼠爬杆总时间(P<0.01、P<0.05);温肾养肝方高、中、低剂量能够延长PD模型小鼠转棒实验的在棒时间(P<0.01,P<0.05,P<0.05);逆转鱼藤酮诱导的TH阳性神经元数目的减少,上调TH蛋白表达,逆转PD模型小鼠α-syn表达的上调。同时温肾养肝方高剂量组可显著抑制鱼藤酮模型小鼠中脑 p-JNK、Cleaved caspase-3 及NF-κB 的表达(P<0.05,P<0.05,P<0.01),上调 Bcl-2的表达(P<0.05),并降低血清中TNF-α、IFN-γ、NF-κB、IL-1β的含量(均P<0.001);温肾养肝方主要影响PD小鼠变形菌、毛螺菌科和普雷沃氏菌。结论:1.温肾养肝方可减少患者抗帕金森用药剂量,可缓解帕金森病患者非运动症状,尤其是胃肠道症状;温肾养肝方以肠道为靶点治疗帕金森病,可改善便秘症状、调节血液中脑肠肽水平。2.健康人与帕金森病患者菌群有一定差异,温肾养肝方治疗后肠道菌群发生改变。3.温肾养肝方具有显著神经保护作用,其作用机制可能为通过调控JNK信号通路,进而抑制炎症和细胞凋亡。该复方可能从调节肠道菌群方面治疗帕金森病,增加有益菌属丰度,可降低有害菌属的大量繁殖。