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目的本研究通过检测正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌组织中hTERT选择性剪接变异体(ASVs)的表达,初步揭示胃癌多阶段演变过程中hTERT选择性剪接模式的变化;并设计选择性剪接位点特异性引物,排除无功能的hTERT ASVs的干扰,更准确地检测功能性hTERT mRNA表达水平的变化,以期为胃癌及癌前病变的诊断提供更可靠的实验依据。方法选择hTERT前体mRNA的3个选择性剪接位点—a、β、γ,在位点内或横跨位点设计引物,采用半巢式RT-PCR特异性扩增8个hTERT ASVs,通过琼脂糖凝胶电泳检测各ASVs在正常胃粘膜、胃癌前病变、胃癌组织中的表达阳性率,各ASVs经测序鉴定;在β位点序列内设计下游引物,a位点和β位点之间设计上游引物,排除β位点缺失的ASVs的干扰,采用SYBR Green实时定量RT-PCR法检测胃癌及癌前病变中β~+ASV(β位点保留的ASVs)的表达水平。结果1.a~+β~+γ~+ASV(a、β、γ位点均保留的ASV)、a缺失型ASV、β缺失型ASV(β位点保留,a、γ位点缺失的ASV)、γ缺失型ASV、aβ缺失型ASV、βγ缺失型ASV、aγ缺失型ASV经测序鉴定与目的序列完全一致,本实验未检测到aβγ缺失型ASV。2.a~+β~+γ~+ASV在正常胃粘膜中不表达,胃癌中表达阳性率高于胃癌前病变,三组间的差异有统计学意义(P<0.05)。3.β缺失型ASV在正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌组织中均普遍表达,阳性率的差异没有统计学意义(P>0.05);其余5种ASVs的表达阳性率较低,且三组间的差异没有统计学意义(P>0.05)。4.RT-PCR显示,β~+ASV在正常胃粘膜中不表达,在部分胃癌前病变和大多数胃癌组织中表达,三组间阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。癌前病变组织中不典型增生病变(4/4)均表达β~+ASV,而只有一小部分肠化生病变(2/16)表达β~+ASV。5.荧光实时定量RT-PCR检测显示,胃癌中β~+ASV的表达水平比胃癌前病变高6.99倍。结论胃癌的多阶段演变过程中hTERT选择性剪接模式是不同的,主要表现为α~+β~+γ~+ASV表达升高;无功能的β位点缺失的hTERT ASVs在胃癌形成过程中普遍表达,容易导致功能性hTERT mRNA定性检测的假阳性或定量检测的不准确;胃癌形成过程中β~+ASV表达水平逐步升高,提示β~+ASV的检测可能为胃癌及癌前病变的诊断提供实验依据。