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背景:血小板是由巨核细胞发育成熟后细胞质脱落形成的无核细胞,其在血栓与止血、炎症、肿瘤转移和血管生成等病理生理过程中有着重要的作用。血小板的异常活化可以导致包括动脉血栓(心肌梗死),静脉血栓(深静脉血栓)和微血管血栓(DIC)在内的血栓性疾病,严重威胁着生命健康。血小板糖蛋白GPIb-IX复合物及其传导的信号在血小板的粘附,聚集和活化中起到关键作用。GPIb-IX信号传导包括Src,PI3K,MAPKs和多种放大机制。MAPKs中的p38和ERK1/2已被证明是GPIb-IX介导的血小板粘附和聚集的关键蛋白,但另一成员ERK5在GPIb-IX介导的血小板活化中的功能仍然未知。为此我们进行了 ERK5参与GPIb-IX介导血小板活化的机制研究。目的:研究ERK5在GPIb-IX介导的血小板活化中的功能。方法:评估ERK5抑制剂XMD8-92对botrocetin/VWF或ristocetin/VWF诱导血小板两相聚集和高剪切力作用下血小板粘附到VWF的影响。通过血小板免疫共沉淀,质谱分析和western印迹来鉴定ERK5的结合蛋白。通过特异性抑制剂和western印迹来明确ERK5及其结合蛋白在GPIb-IX介导的血小板活化中的作用。结果:在被botrocetin/VWF或ristocetin/VWF刺激的人血小板中,ERK5的磷酸化水平显着增强。ERK5抑制剂XMD8-92能显著抑制botrocetin/VWF或ristocetin/VWF诱导的人血小板聚集的第二相。同时,XMD8-92抑制了高剪切力作用下血小板粘附到VWF的程度。免疫沉淀和质谱分析显示ERK5与CKII结合。XMD8-92和CKII的抑制剂TBB能特异性地抑制PTEN的磷酸化,进而抑制血小板中Akt的磷酸化。结论:ERK5与CKII结合,通过PTEN/PI3K/Akt通路调控GPIb-IX介导的血小板活化。其他:ERK5的激活在血小板中是激动剂特异性的。ERK5抑制剂XMD8-92也用于检测对其他血小板激动剂例如胶原(collagen),凝血酶(Thrombin),血栓烷受体激动剂U46619(TxA2类似物)和P2Y12受体激动剂诱导的血小板聚集和粘附的影响。ERK5抑制剂降低了 Thrombin受体和TxA2受体信号传导而不影响胶原或P2Y12受体(由ADP激活)引起的血小板聚集。此外,ERK5参与到血小板粘附到固定的纤维蛋白原的过程中。需要后续研究来阐明ERK5在其他激动剂和整个血小板活化中的的更多功能。