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研究背景:脑卒中是由于供应脑部血液的血管发生阻塞或者破裂,从而导致脑部血液循障碍或引起脑组织结构和功能损害的一种急性脑血管病,由于卒中发病机制的不同,一般可分为出血性卒中（又名颅内出血）和缺血性卒中（又名脑梗死）。缺血性卒中（Ischemic strokes,IS）具有比出血性卒中更高的发病率和致残率,且在缺血性卒中的治疗过程中,用多种治疗手段恢复血流供应后可对大脑产生更严重的损伤,临床上称为脑缺血再灌注损伤（Cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）。然而由于CIRI发病机制复杂,目前尚未完全阐明,导致临床治疗CIRI的药物和方法十分有限,因此急需深入研究CIRI及其保护机制,寻找一种新型的可辅助或可治疗CIRI的针对性药物。芒果苷是从中药知母的根茎和芒果叶中提取出来的一种双苯丙酮类黄酮类化合物,具有良好的抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病、抗炎及调节免疫、保肝利胆等多种药理活性,可在中枢神经系统、心脑血管系统及呼吸系统等多种疾病中发挥积极的治疗作用。然而,MGF对CIRI是否具有保护作用,及如何发挥保护作用的具体分子机制仍未完全证明,有待进一步研究。沉默信息调控因子（Silent information regulator 1,SIRT1）是Sirtuin家族中的一员,有研究表明,多种天然药物可通过调控SIRT1分子的表达在中枢神经系统中发挥保护作用。过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子1α（Peroxisome proliferators-activated receptor-γcoactivator 1α,PGC-1α）既是SIRT1的靶蛋白,又被证实可在脑卒中等神经系统疾病中发挥抗损伤作用。值得注意的是,SIRT1通过调控PGC-1α而发挥多种保护作用的研究已被证实。然而,SIRT1是否可通过调控PGC-1α信号通路在CIRI中发挥保护作用尚不清楚,有待进一步阐明。研究目的:小鼠来源的神经元/神经细胞模型N2a细胞和缺氧/复氧损伤（Hypoxia/Reoxygenation,HR）模型是经典的研究脑缺血再灌注损伤的体外模型。因此,本研究将在细胞水平,通过一系列实验方法和检测手段,探究:（1）MGF对神经细胞HR损伤是否具有保护作用;（2）MGF是否通过调控SIRT1/PGC-1α信号通路在神经细胞HR损伤中发挥保护作用。研究方法:1.以N2a细胞为研究对象,构建HR损伤模型,主要分为以下三部分实验:（1）MGF毒性实验;（2）MGF预保护实验;（3）MGF抗HR损伤实验。使用Muse细胞分析仪、荧光显微镜等仪器和Western Blot等方法检测各组相关指标,进一步在细胞水平阐明MGF对N2a细胞HR损伤的保护作用。2.以N2a细胞为研究对象,通过siRNA技术对SIRT1基因进行干扰,构建HR损伤模型,主要分为以下三部分实验:（1）SIRT1 siRNA毒性实验;（2）SIRT1 siRNA干扰片段鉴定实验;（3）MGF抗SIRT1 siRNA1269干扰N2a细胞HR损伤实验。通过一系列仪器和方法检测并比较各组相关指标,探讨MGF在N2a细胞HR损伤中的保护作用,进一步证实SIRT1/PGC-1α通路的激活在MGF保护CIRI过程中的关键作用。研究结果:第一部分:MGF对N2a细胞HR损伤保护作用的研究（1）与Control组相比,不同浓度MGF（5、10、20、50、100μM）处理N2a细胞24h后,各组细胞形态和细胞活率无明显变化;（2）与Control组相比,不同浓度MGF（5、10、20、50、100μM）处理N2a细胞24h,MGF组可显著上调SIRT1和PGC-1α蛋白的表达;（3）与Control组相比,HR组细胞形态明显皱缩,贴壁减少;细胞活率显著降低（P＜0.05）;与HR组相比,MGF+HR组细胞形态明显改善,细胞活率显著提高（P＜0.05）;凋亡率显著下降（P＜0.05）;培养液LDH水平下降（P＜0.05）;细胞内ROS生成减少（P＜0.05）;（4）与Control组相比,HR组SIRT1、PGC-1α、Nrf2、NQO1、HO-1、NRF1、UCP2、Bcl2等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与HR组相比,MGF+HR组上述蛋白表达水平显著上调（P＜0.05）。第二部分:SIRT1 siRNA对MGF抗N2a细胞HR损伤作用的影响（1）与Control siRNA组相比,SIRT1 siRNA508、SIRT1 siRNA800及SIRT1siRNA1269（100p M,24h）细胞形态和细胞活率无明显变化;（2）与Control siRNA组相比,SIRT1 siRNA1269可显著降低SIRT1 mRNA（P＜0.05）;（3）与Control siRNA+MGF+HR组相比,SIRT1 siRNA+MGF+HR组细胞皱缩,贴壁减少,细胞活力明显降低（P＜0.05）;凋亡率显著升高（P＜0.05）;培养液LDH水平上升（P＜0.05）;细胞内ROS生成增多（P＜0.05）;（4）与Control siRNA+MGF+HR组相比,SIRT1 siRNA+MGF+HR组SIRT1、PGC-1α、Nrf2、NQO1、HO-1、NRF1、UCP2及Bcl2的表达水平显著显著降低（P＜0.05）。研究结论:（1）MGF对神经细胞HR损伤具有显著的保护作用。（2）MGF可通过激活SIRT1/PGC-1α通路、抑制氧化应激反应和线粒体功能障碍发挥抗神经细胞HR损伤的保护作用,有望成为治疗CIRI的候选药物。