基于HCV E2序列保守性评估及B-cell表位预测筛选基因型特异性表位多肽

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背景:丙型肝炎是一种由HCV感染引起的全世界范围的传染病。HCV感染慢性化导致患者肝脏纤维化和肝硬化,甚至肝细胞癌。HCV基因组学,尤其是E2区域序列的高突变率,使得基因分型越来越多样化、HCV及基因分型的检测要求越来越严格,慢性感染者对常规抗病毒治疗应答不佳以及预防HCV感染的疫苗研制工作举步维艰。基于序列的保守性评估和表位预测合成的表位多肽,由于具有高度的保守性及良好的抗原活性,成为当今科学界研究的热点。利用该技术构建合成的HCV保守性表位多肽,在HCV感染性疾病的诊断、治疗及预防的探索研究也已得到广泛开展。目的:基于HCV E2区序列的保守性评估和B-cell表位预测合成表位多肽,分析其与HCV组和对照组血清结合性的差异,筛选基因型特异性表位多肽;基于此类表位多肽预期:建立HCV及基因分型血清学ELISA检测技术;识别此类表位多肽的特异性抗体通过抗原抗体结合,封闭HCV感染人体靶细胞的位点或灭活病毒,起到有效的抗病毒作用;通过诱导动物产生中和抗体,而成为预防HCV感染的候选免疫原,为制备新型肽类疫苗提供依据。方法:本研究利用MEGAv5.05软件,对NCBI protein数据库中HCV1a、1b、4d基因型的各40条E2序列进行保守性评估及B-cell表位预测和表位设计,得到此3种基因型特异及共有的保守性B-cell表位序列,化学合成表位多肽。通过ELISA实验,测定4种表位多肽分别与29例HCV感染者及25例非HCV感染者血清结合的OD450值,使用SPSS v20.0软件进行差异性分析,两组间比较应用t/t’检验方法(P<0.05),明确HCV感染组与对照组数据差异及统计学意义。结果:实验合成4条HCV B-cell表位多肽,分别为1a特异性序列DC-13(434-DTGWLAGLFYYHK-446)、1b特异性序列HC-13(434-HTGFLAALFYAKS-446)、4d特异性序列NC-13(434-NTGFLASLFYTHK-446)和共有序列FC-9(447-FNSSGCPER-455)。ELISA实验及数据分析显示:DC-13、NC-13和FC-9与HCV感染组血清结合OD450值均高于对照组,差异具有统计学意义;HC-13与HCV-1b感染组血清结合OD450值高于HCV-2a感染组,差异具有统计学意义,但与HCV-1b感染组和对照组的血清结合OD450值差异无统计学意义。结论:实验合成4条HCV B-cell表位多肽,即1a、1b、4d型特异性表位多肽及共有表位多肽;其中,1a、4d型特异性表位多肽及共有表位多肽与HCV感染者血清结合性均高于非HCV感染者,1b型特异性表位多肽与HCV1b感染者血清结合性明显高于HCV2a感染者。
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