【摘 要】
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目的:实验检测早孕期发生MA（missed abortion,稽留流产）患者及非医学原因选择无痛人流术的妇女绒毛组织中NLRP3（nod-like receptor protein 3,核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族蛋白3）、Caspase-1（cycsteinyl aspartate-specific protease-1,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1）及IL-1β（interleukin-
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目的:实验检测早孕期发生MA（missed abortion,稽留流产）患者及非医学原因选择无痛人流术的妇女绒毛组织中NLRP3（nod-like receptor protein 3,核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族蛋白3）、Caspase-1（cycsteinyl aspartate-specific protease-1,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1）及IL-1β（interleukin-1β,白细胞介素-1β）的表达情况,分析NLRP3、Caspase-1及IL-1β在两组绒毛组织中的表达差异,探究NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎性小体通路对稽留流产发生发展的影响,为稽留流产的预防和诊疗提供一定理论基础。方法:选取2019年4月至2019年9月在广西壮族自治区平果县人民医院和平果县妇幼保健院住院确诊为早期MA的患者25例为稽留流产观察组（MA观察组）,同期非医学原因选择行无痛人流术的早孕妇女25例为正常对照组,人流术后立即收集新鲜的绒毛组织。实时定量PCR（quantitative realtime polymerase chain reaction,RT-PCR）技术检测两组绒毛组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1β的m RNA表达情况;将两组绒毛组织制作成病理切片后,采用HE（hematoxylin-eosin,苏木素-伊红）染色处理病理切片,光学显微镜下观察两组绒毛的组织形态结构;应用IHC（immunohistochemistry,免疫组织化学技术）SP（streptavidin-perosidase,免疫组织化学技术辣根酶标记链酶卵白素）法检测两组绒毛组织标本中NLRP3、Caspase-1和IL-1β的表达定位,光学显微镜下拍照后,通过Image Pro Plus 6.0软件对照片进行分析后计算出NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的相对表达量。结果:1.RT-PCR结果:MA观察组的绒毛组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β的m RNA相对表达水平均明显高于正常对照组（P<0.05）,差异有统计学意义。2.HE处理后光学显微镜下查看可见,正常对照组的绒毛形态规则,大小均匀,绒毛结构完整,表面覆盖双排结构完整、排列整齐的滋养层细胞,合体滋养层在外侧,主要有细颗粒状或空泡状的细胞浆,细胞滋养层在靠内一层,呈立方、多边形或椭圆形,边际清晰,胞浆透亮,绒毛间质无水肿。MA观察组绒毛的正常形状结构被破坏,并发生了不同程度的退行性病变甚至坏死;细胞与细胞之间的排列紊乱,滋养层细胞两层的原本排列整齐的结构减少甚至消失,绒毛内部的间充质变稀少,发生水肿或纤维变样性,周围可见陈旧性血凝块及炎症细胞浸润。3.光学显微镜观察免疫组化SP法处理后的绒毛样品可见:正常对照组和MA观察组的绒毛滋养层细胞均表达NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白,它们主要在滋养细胞的细胞质中表达,于绒毛间质中少量表达,且在稽留流产组中的染色强度都显著高于正常对照组。拍照后经Image Pro Plus 6.0软件分析,用AOD（average optical density,平均光密度值）来表示染色强度的大小。结果显示,MA观察组NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达量明显高于正常对照组,两者间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。4.Pearson相关性分析结果表明,在MA观察组中,NLRP3蛋白表达量与Caspase-1蛋白表达量之间呈正相关关系,NLRP3蛋白与IL-1β蛋白表达量之间呈正相关,Caspase-1蛋白与IL-1β蛋白表达量之间呈正相关;在正常对照组绒毛组织中NLRP3蛋白与Caspase-1蛋白相对表达量之间无相关,NLRP3蛋白相对表达量与IL-1β蛋白相对表达量不相关,Caspase-1蛋白表达量与IL-1β蛋白表达量正相关。结论:1.NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎性小体通路在稽留流产患者绒毛组织中被激活,并在稽留流产的发生发展过程中发挥了一定作用。2.NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎性小体通路在正常早孕绒毛组织中未被激活,Caspase-1与IL-1β通过其他途径在维持正常妊娠中发挥作用。
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