论文部分内容阅读
目的皮肤损伤后主要由再生和瘢痕愈合两种方式。CTGF、I型和Ⅲ型胶原蛋白的含量在不同愈合方式具有差异性。然而,CTGF、I型和Ⅲ型胶原蛋白在皮肤再生及瘢痕愈合过程中序贯性表达,CTGF直接应用于创面对于创面愈合及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达影响的报道较少。本研究旨在检测CTGFⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白在皮肤再生及瘢痕愈合过程中序贯性表达差异,应用CTGF对于创面愈合及创面中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法1、50只日本大耳白兔,雌雄不拘,体重均为2.5—3.0Kg,单只单笼适应性饲养7天后。随机分为两组：CTGF组、CTGF抗体组,每组25只兔子,组内设空白对照,视为正常对照(NS)组。5%硫化钠行兔耳腹侧脱毛。以2%戊巴比妥钠(1.5ml/kg)行耳缘静脉麻醉后,分别于每只兔耳腹侧用取皮刀切取大小均为10.0mm×10.0mm楔形创面,由浅及深的方向随机选取为耳尖向耳根或耳根向耳尖,最深至软骨层。于创面耳缘平行于浅层伤口起始处做小切口标记。术后常规抗感染治疗,自由进食。2、CTGF组自伤后当日起,每只兔左耳创周以30G针头注射浓度为100.0ng/ml的rhCTGF0.1ml,隔日一次,直至创面愈合；右耳所有创面注射等量生理盐水作为空白对照。CTGF抗体组自伤后当日起,每只兔左耳创周以30G针头注射浓度为5.0μg/ml的CTGF抗体0.1ml,隔日一次,直至创面愈合；右耳所有创面注射等量生理盐水作为对照。所有创面均以无菌辅料包扎并卷耳固定。3、各组分别于伤后第0天、4天、8天、12天、30天随机选取5只兔子,记录创面愈合及瘢痕情况并拍照保存。每次取材分别切取两组兔子左耳创面,各5个创面,另外两组所有右耳创面作为正常对照组。所有标本均以10%中性甲醛固定,24h后脱水,常规石蜡包埋、切片。行HE染色及CTGF、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白免疫组化染色。4、以显微镜观察创面深侧及浅层面愈合过程中的组织形态变化和CTGF、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达差异。将切片创面由深到浅分为10段,每段1.0mm,深侧边缘内4.0mmm范围视为深侧创面,浅侧边缘内4.0mmm视为浅侧创面,两侧创面分别任取5个视野进行观察并采图,以Image-Pro-plus 6.0软件测量每个视野的平均光密度值。创面愈合情况照片用Image-Pro-plus 6.0软件计算创面面积,并计算创面愈合率。以spss19.0软件分析数据,方差齐时多组间均数比较采用方差分析,当方差不齐时采用秩和检验,P<0.05时差异具有统计学意义。结果1、浅侧创面(距浅侧创缘内0-4mm为浅侧创面)于8天内实现再生,深侧创面(距浅侧创缘内约6-10mm为深侧创面)12天时创面明显缩小,瘢痕形成,第30天时瘢痕增生仍然明显。创面应用rhCTGF创面愈合率第4天为(36.4±6.3)%、8天为(81.6±5.8)%、12天为(92.2±5.3)%,分别高于对照组的(30.3±5.6)%、 (69.8±4.7)%和(85.3±5.2)%(P<0.05)。应用CTGF抗体创面愈合率第8天和12天时分别为(58.6±6.9)%和(76.8±6.9)%,低于对照组(P<0.05),但第4天时与对照组相同(P>0.05)。2、深侧创面各时间点CTGF的表达均高于浅侧创面(P<0.05)。浅深两侧创面CTGF表达规律基本相同：第4天升高(P<0.05),第8天达高峰(P<0.05),第12天时开始下降,但深侧创面仍高于正常组织(P<0.05),而浅侧创面则恢复正常。至第30天时创面中CTGF含量与正常皮肤组织相同(P>0.05)。3、深侧创面各时间点Ⅰ型胶原蛋白的表达均高于浅侧创面(P<0.05)。浅深两侧创面Ⅰ型胶原蛋白12天内表达规律基本相同：第4天升高(P<0.05),第8天达高峰(P<0.05),第12天时开始下降,但第30天时深侧创面表达再次升高(P<0.05),但浅侧创面却未升高(P>0.05)。创面应用rhCTGF后各时间点Ⅰ型胶原蛋白表达分别高于对照组(P<0.05),而创面应用CTGF抗体后各时间点Ⅰ型胶原蛋白表达分别低于对照组(P<0.05)4、深侧创面各时间点Ⅲ型胶原蛋白的表达均低于浅侧创面(P<0.05)。浅侧创面Ⅲ型胶原蛋白自伤后第4天起持续升高(P<0.05)；深侧创面Ⅲ型胶原蛋白表达：第4天升高(P<0.05),第8天达高峰(P<0.05),此后逐渐下降(P<0.05),但第30天时仍高于正常皮肤(P<0.05)。创面应用rhCTGF后各时间点Ⅲ型胶原蛋白表达分别高于对照组(P<0.05),而创面应用CTGF抗体后各时间点Ⅲ型胶原蛋白表达分别低于对照组(P<0.05)。5、深侧创面各时间点Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例均高于浅侧创面(P<0.05)。浅深两侧创面Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例12天内表达规律基本相同：第4天升高(P<0.05),第8天达高峰(P<0.05),第12天时开始下降(P<0.05),但第30天时深侧创面表达再次升高(P<0.05),而浅侧创面却未升高(P>0.05)。创面应用rhCTGF后各时间点Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例分别高于对照组(P<0.05),而创面应用CTGF抗体后各时间点Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例分别低于对照组(P<0.05)结论1、瘢痕愈合的兔耳深侧创面CTGF、Ⅰ型胶原蛋白的表达和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例高于再生愈合的浅侧创面,而Ⅲ型胶原蛋白的表达则深侧创面低于浅侧创面；2、CTGF可促进兔耳皮肤创面愈合并上调Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例升高。