本生烟（Nicotiana benthamiana）是属于管状花目、茄科、烟草属的草本植物。原产于澳大利亚,是研究植物-微生物相互作用的的模式生物之一。本生烟突变体库的建立可以帮助验证基因序列与基因功能之间的关系,也可以成功获得该基因序列的信息;同时,在本生烟功能基因的克隆和鉴定等方面提供重要的技术支持和帮助,也为本生烟育种提供重要的种质资源。本实验以本生烟无菌苗的叶片为实验材料,优化了农杆菌介导的遗传转化体系,获得了最佳的农杆菌侵染浓度;同时对本生烟离体再生体系进行了优化,研究了不同实验条件对本生烟组织培养的影响,获得了最佳的预培养时间、共培养时间和共培养温度,进而建立了高效的本生烟遗传转化体系,在这些条件的基础上,初步开展构建本生烟激活标签突变体库的相关工作,获得600个本生烟激活标签突变体;进一步的筛选鉴定,获得了395个抗性突变体。同时,在筛选过程中观察到了多种表型的出现:嵌合型白化表型、尖叶突变体表型、不育表型和基因沉默等表型。经过多代的培养观察,最后获得了一个确定的、可遗传的突变体表型ZJ908-A241-4株系。主要研究结果如下:1.确定了最佳的转化条件:预培养时间1d、共培养时间3d、温度18℃和农杆菌侵染浓度在OD600=0.6～1.0。2.在最佳的遗传转化体系基础上,通过烟草叶盘法转化技术获得600个独立转化单株,并观察到嵌合型白化表型、尖叶突变体表型、不育表型。3.对转化成功的600个突变体进行Basta抗性筛选鉴定,确定了395个抗性突变体。同时对抗性突变体进行了分离比的统计、基因沉默观察和特殊表型的观察统计。4.获得了1个尖叶表型纯系,并对该表型进行PCR鉴定和长宽比数据统计。5.上述株系遗传背景进行了考察,确定该株系是纯合、其表型时真实可遗传的。综合上所述,本研究确定了本生烟最佳的组织培养条件和遗传转化条件,在此基础上共获得了395个抗性突变体,获得一个稳定遗传的叶型突变体纯系ZJ908-A241-4株系。