灵芝三萜的制备、分离纯化及抗氧化活性的研究

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灵芝三萜(G.lucidum triterpenes)作为灵芝的主要药理活性成分之一,常用作评价灵芝产品质量的重要指标之一,具有抗肿瘤、保肝护肝、降血糖、降血脂、抗氧化等药理活性。冠县灵芝每年产量高达8000吨,是“十三五”期间刚刚脱贫致富的省级贫困县,其中灵芝产业对当地菇农脱贫致富发挥了重要作用。但冠县灵芝与南方灵芝(如龙泉灵芝)相比,长期存在量多价低的现象。为了提高冠县灵芝产品的附加值,更好地服务当地经济,本研究选冠县灵芝作为研究对象,并以龙泉灵芝作为参照,主要研究了冠县灵芝三萜的提取优化、分离纯化、成分检测和抗氧化活性,本研究将为合理开发灵芝资源提供理论依据。主要结论如下:采用热醇浸提法分别提取冠县灵芝子实体三萜(Guanxian G.lucidum fruiting bodies triterpenes,GGLBT)、孢子粉三萜(Guanxian G.lucidum spores triterpenes,GGLST)、龙泉灵芝子实体三萜(Longquan G.lucidum fruiting bodies triterpenes,LGLBT)及孢子粉三萜(Longquan G.lucidum spores triterpenes,LGLST)。通过响应面试验,得到GGLBT最佳提取条件为:液料比50.09:1 m L/g,浸提时间2.35 h,浸提温度48.77℃,实际三萜得率为1.39%;GGLST最优组合为:液料比50.62:1 m L/g,浸提时间1.56 h,浸提温度40.49℃,实际三萜得率为1.78%;LGLBT最优提取条件为:液料比54.44:1m L/g,浸提时间2.02 h,乙醇浓度91.63%,实际三萜得率为0.77%;LGLST最优提取条件为:液料比98.92:1 m L/g,浸提时间2.87 h,浸提温度62.64℃,实际三萜得率为1.51%。在最优条件下提取得率顺序为:GGLST>LGLST>GGLBT>LGLBT,两种灵芝孢子粉三萜的提取得率均高于子实体,冠县灵芝三萜的提取得率均高于龙泉灵芝。选用AB-8型大孔树脂,对GGLBT和GGLST分别进行静态吸附-解吸试验,在单因素的基础上,进行正交工艺优化,结果表明,GGLBT静态吸附-解吸试验吸附率和解吸率分别为0.66%和0.73%;GGLST静态吸附-解吸试验吸附率和解吸率分别为0.47%和0.66%。高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)图结果表明,冠县灵芝与龙泉灵芝子实体三萜成分与含量均多于其相应的孢子粉三萜成分。GGLBT成分主要为弱极性三萜,LGLBT在中等极性与弱极性区域也均有峰出现,但三萜成分主要为中等极性三萜;GGLST与LGLST均只存在弱极性三萜成分。抗氧化试验结果表明:四种三萜(GGLBT、GGLST、LGLBT和LGLST)均具有抗氧化活性,且浓度与活性呈正相关。LGLBT的抗氧化活性比GGLBT的抗氧化活性高;GGLST的铁离子还原力和DPPH自由基清除率明显高于LGLST。粗提物GGLST、GGLBT、纯化产物GGLST-1、GGLST-2、GGLBT-1和GGLBT-2的抗氧化活性呈现浓度依赖性。其中,GGLBT-2的还原力、对DPPH自由基的清除率和对羟自由基的清除能力均最强,且均高于粗提物GGLBT,表明树脂AB-8纯化GGLBT有助于抗氧化活性的提高。
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