铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生草本植物,具有滋阴清热、益胃生津和护肝利胆等功效。铁皮石斛分布区域广,生态居群多样,其化学成分类型和含量可能因分布区域和遗传背景等不同而有所不同。本研究运用指纹图谱等技术并结合多糖及醇溶性浸出物含量测定,探究了不同地域、不同形态、不同部位、不同采收期的铁皮石斛以及铁皮石斛与其它石斛化学成分类型和含量差异。主要研究结果如下:1.确定了铁皮石斛HPLC色谱分析条件。以《中华人民共和国药典》中醇溶性浸出物含量测定方法处理石斛样品,将提取液浓缩、过滤,以乙腈(A),0.3%的磷酸水溶液(B)作流动相进行梯度洗脱。洗脱程序:时间梯度0→5→25→60→105→139→165min,乙腈(A)对应的浓度梯度:5%→5%→10%→15.5%→24%→33%→39%;检测波长210 nm;流速1.0 m L/min;色谱柱:UltimateXB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);进样量:20μL。此色谱分析条件适用于建立铁皮石斛样品指纹图谱。2.建立了多个不同地域种植的铁皮石斛醇溶性浸出物指纹图谱,并分析了主要成分的变化规律。(1)建立了广东、浙江和云南等10个省份种植的铁皮石斛指纹图谱,通过比对发现,图谱中有27个共有峰,可作为辨别铁皮石斛的特征峰。安徽省栽种的铁皮石斛色谱峰数目最多为114个,贵州省的最少为92个。各省之间的相似度在0.229~0.861之间,说明各省铁皮石斛醇溶性浸出物中化学成分差异很大。通过聚类分析,可将云南和贵州产的铁皮石斛归为一类,其他8个省份的归为另一类。多糖和醇溶性浸出物含量这两个指标均较高的产地为浙江、安徽、云南、江西和湖南。(2)云南和浙江栽种的铁皮石斛分别有67个、69个共有峰,相似度分别在0.712~0.880、0.698~0.775之间。可将云南保山产的铁皮石斛单独归为一类,其他产地的归为另一类;浙江乐清产的铁皮石斛与其他三个种植区的不同,单独作为一类。同一产地铁皮石斛多糖含量较高时,其醇溶性浸出物含量相对较低。3.建立了不同种质(品种)和同一种质不同部位铁皮石斛醇溶性浸出物指纹图谱,并分析了主要成分的变化规律。(1)在同一地方种植的不同铁皮石斛种质(品种)的代表性特征图谱不同。T6和T701在t_R=136.5 min、138 min、142 min、144 min有较大峰面积的色谱峰,T636则没有;T6在t_R=160 min特征峰面积较大,T636在t_R=18min、89 min特征峰明显。(2)铁皮石斛茎部和叶部指纹图谱色谱峰数目相近,但叶中的总峰面积比茎中的高。叶中的在45 min<t_R<70 min色谱峰与茎中的区别明显。(3)“红杆铁皮”色谱峰数目及峰面积比“青杆铁皮”’要高,多糖和醇溶性浸出物含量也较高,“红杆铁皮”品质更好。4.研究了不同采收期的铁皮石斛指纹图谱,发现铁皮石斛总峰面积、色谱峰数目及醇溶性浸出物含量从当年11月份开始下降,次年3月份至5月份相对稳定,到次年7月份前后开始小幅上升。5.建立了铁皮石斛、金钗石斛、美花石斛、齿瓣石斛四种石斛的指纹图谱。它们指纹图谱概貌差异很大,这四种石斛有22个共有峰。它们之间的相似度在0.061~0.217之间,其中铁皮石斛与金钗石斛、美花石斛、齿瓣石斛之间的相似度分别为0.042、0.061、0.217,四种石斛之间的相似度很小,其化学成分类型和含量差异较大。美花石斛特征峰保留时间分别为t_R=17.5 min、92 min、109 min、116 min、162 min;金钗石斛特征峰保留时间为t_R=13 min,铁皮石斛特征峰保留时间为t_R=160 min。所以根据特征峰的保留时间可以区别不同种类的石斛。