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目的：肝细胞癌(HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，而且手术或介入治疗后复发率较高，药物治疗效果不理想，死亡率高，其高侵袭转移能力是导致肝癌预后不良的关键因素。因此，进一步研究肝癌侵袭转移的机制，确定调控人类肿瘤转移关键基因、探求新的治疗思路成为当今研究热点。肝癌的转移是一个多因素、多步骤的序贯过程，涉及到细胞的粘附、迁移运动、基质降解能力和细胞宿主、组织微环境等多种因素调控。蛋白酶激活受体-2(PAR-2)是细胞膜上的一种G蛋白偶联受体，胰蛋白酶、类胰蛋白酶等是该受体的天然激动剂，人工合成的小分子多肽如SLIGKV-NH2也可激活该受体。研究发现PAR-2表达强弱与多种肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。前期研究发现肝癌组织PAR-2表达较癌旁组织升高，肝癌细胞HepG2、SMMC-7721也表达PAR-2，胰蛋白酶、SLIGKV-NH2作用于HepG2可激活PAR-2，进而促进肝癌HepG2细胞增殖、DNA合成和细胞分裂。本试验通过体外培养人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721，研究内源性激动剂胰蛋白酶和人工合成激动剂SLIGKV-NH2激活肝癌细胞表面PAR-2后，对肝癌细胞侵袭、转移的影响，并探讨其调节作用的可能分子机制。
方法：PAR-2的天然激动剂胰蛋白酶和人工合成的激动剂SLIGKV-NH2(PAR-2-AP)作用于HepG2、SMMC-7721细胞，以反肽VKGILS-NH2(PAR-2-RP)和无血清培养基做对照；粘附实验检测细胞黏附力，Transwell小室法检测PAR-2激活前后细胞侵袭和迁移力；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、IL-8、FAK、MMP-2、MMP-9mRNA的表达差异；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测VEGF-A、IL-8的活性；Westem blot检测FAK及磷酸化活性蛋白表达；明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性变化。
结果：
1、粘附试验检测PAR-2激活前后细胞对matrigel粘附能力：一定浓度的胰蛋白酶组和SLIGKV-NH2作用于HepG2、SMMC-7721细胞4h后能显著促进细胞对matrigel胶的粘附能力，反肽组VKGILS-NH2对细胞粘附力与对照组无明显差异。
2、Transwell小室法检测PAR-2激活前后细胞侵袭和迁移能力变化：在侵袭试验中，一定浓度的胰蛋白酶及SLIGKV-NH2和作用后，HepG2和SMMC-7721细胞水解破坏matrigel胶穿过聚碳酸酯膜的细胞数均高于对照组及反肽VKGILS-NH2组，差异有统计学意义。迁移试验中PAR-2经胰蛋白酶和SLIGKV-NH2激活后促进HepG2和SMMC-7721细胞经变形运动穿过聚碳酸酯膜的细胞数均高于对照组及反肽VKGILS-NH2组，差异有统计学意义。
3、RT-PCR和ELISA检测PAR-2激活前后细胞VEGF和IL-8mRNA和表达变化：RT-PCR首先检测VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、IL-8mRNA表达差异发现，胰蛋白酶组和SLIGKV-NH2作用于HepG2、SMMC-7721细胞后VEGF-C、VEGF-DmRNA表达差异无统计学意义，VEGF-A、IL-8mRNA表达显著增强，ELISA检测结果同时显示细胞分泌VEGF-A、IL-8表达也显著增强。
4、RT-PCR和Western blot实验检测PAR-2激活前后细胞FAK表达变化：结果显示一定浓度的胰蛋白酶组和SLIGKV-NH2作用于HepG2细胞后FAK mRNA表达量显著增强，与对照组及反肽组比较有显著差异。Westernb1ot结果显示在HepG2细胞FAK磷酸化也显著增强，与RT-PCR结果一致。
5、RT-PCR和明胶酶谱实验检测PAR-2激活前后细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达和活性变化：结果显示一定浓度的胰蛋白酶组和SLIGKV-NH2作用于HepG2细胞后MMP-2、MMP-9mRNA表达量显著增强与对照组及反肽组比较有显著差异。明胶酶谱结果显示在HepG2细胞明胶水解能力也显著增强，与RT-PCR结果一致。
结论：
1、胰蛋白酶和SLIGKV-NH2可通过激活PAR-2促进肝癌细胞HepG2、SMMC7721的粘附、侵袭、迁移能力。
2、PAR-2经激活后可促进HepG2、SMMC7721细胞分泌VEGF，进而促进肝癌侵袭转移中的血管生成作用。
3、PAR-2经激活后可促进HepG2、SMMC7721细胞分泌IL-8，从而有助于增强细胞的迁移能力及血管生成作用。
4、PAR-2还可通过PAR-2-FAK-MMP-2/9途径降解细胞外基质，进而促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移进程。