拟黑多刺蚁extradenticle基因的克隆及其在mRNA水平上的表达研究

来源 :陕西师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:akiro
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
extradenticle(exd)基因最初是作为Hox基因的辅因子在果蝇突变体中被发现的,它编码的蛋白属于PBC蛋白家族成员。但是随着研究的深入,越来越多的证据表明extradenticle有着更为广泛的生理作用,比如,它在节肢动物的附肢发育及昆虫的背板形成中起重要作用。拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)隶属于膜翅目(Hymenoptera),蚁科(Formicidae),多刺蚁属(Polyrhachis),是一种社会性昆虫和资源昆虫,其群体具有多态现象,品级分化为工蚁、雌蚁和雄蚁,行为复杂、分工明确。本研究以拟黑多刺蚁为实验材料,采用RT-PCR,5’与3’RACE技术,克隆了extradenticle基因的全长cDNA序列;又利用生物信息学方法对其进行了序列分析、进化关系分析和功能预测;应用实时定量PCR技术对extradenticle在拟黑多刺蚁体内的mRNA水平表达进行了相对定量。所获实验结果为:1.拟黑多刺蚁extradenticle基因cDNA序列全长为1854bp,其中包含一个542 bp的5’端非编码区(5’-UTR)、一个136 bp的3’端非编码区(3’-UTR)和一个开放阅读框(ORF),其终止密码位于1716-1718位核苷酸。其开放阅读框编码319个氨基酸残基,生物信息学软件分析其编码蛋白的理论等电点为6.53,分子量为42.7kDa,。将拟黑多刺蚁extradenticle的全长cDNA序列命名为Pvexd,并上传至GenBank数据库,所得序列号为GU223153。2.序列比对,同源性分析表明PvEXD蛋白与其他动物的extradenticle同源基因编码的蛋白的相似性介于58.5%和98.2%之间,其中与意大利蜜蜂EXD的氨基酸序列相似度最大,为98.2%。基于NJ法构建的进化树显示,PvEXD与蜜蜂的EXD先形成一支,然后与其他己知的昆虫EXD聚在一起,最后与脊椎动物PBX聚为一树。生物信息学分析还表明,PvEXD蛋白不是分泌型蛋白。PvEXD蛋白包括一系列的功能位点:3个N型糖基化位点、2个cAMP磷酸化位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、7个肉豆范酞基化位点、2个蛋白激酶C磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点。PvEXD蛋白的二级结构为mixed型。3.采用荧光实时定量RT-PCR定量技术对extradentic在拟黑多刺蚁的不同发育阶段的整个虫体、不同品级的成虫虫体和不同品级的成虫头部的mRNA表达水平进行的相对定量分析的结果显示:从拟黑多刺蚁的发育过程来看,Pvexd在卵期的表达量较高。从卵到三龄总体上呈下降趋势,但一龄到三龄的三个龄期表达差异在统计学上不显著,到四龄Pvexd表达量有所回升,在蛹期的表达量最低。到成虫后又有一明显增多。据Pvexd在拟黑多刺蚁的幼虫虫体和成虫虫体内mRNA水平的表达差异性推测,PvEXD蛋白通过调节细胞分化、细胞凋亡和组织分化,进而参与了个体发育的过程,或是在调节成虫比较复杂的行为中起到重要的作用。对于成虫的三个品级,无论在全身或是在头部,Pvexd在工蚁中的表达量都比雌蚁和雄蚁多,这可能与工蚁独特的品级分化有关,或与工蚁神经系统的形成有关。extradentic在雌蚁和雄蚁全身中的表达量差异不显著,而在二者头部的表达差异显著,雄蚁中的表达量大约为雌蚁中的8倍。由此推测Pvexd可能在蚂蚁精子发生或卵子发生,亦或是在与性别分化有关的生理过程的调控中起作用。本研究首次从社会性昆虫——拟黑多刺蚁体内克隆出extradentic基因的全长cDNA序列,并将其序列上传至GenBank数据库;利用分子生物信息学的方法,分析了extradentic基因的进化关系;通过荧光实时定量PCR进行的相对定量发现Pvexd mRNA在拟黑多刺蚁的不同发育阶段虫体、不同品级的成虫虫体和不同品级的成虫头部中的表达具有差异性。这些结果将会为进一步探讨extradentic基因的功能及对昆虫发育产生的作用和影响奠定基础。
其他文献
随着电子技术的发展以及人工智能的出现,对模糊逻辑和逻辑代数的研究已经成为当前学者讨论的热门话题,并且取得了一系列的科研成果.王国俊教授建立了R0-代数,吴洪博教授通过对R0-代数的研究,提出了BR0-代数以及WBR0-代数.本文通过对WBR0-代数的研究,讨论了WBR0-代数的性质及其与正则剩余格的等价性.本文的结构和详细内容安排如下:第1章预备知识.本章给出了文章中将要用到的格,正则剩余格,BR
算子代数理论产生于20世纪30年代,是一门比较年轻的学科.它与量子力学,线性系统,非交换几何,控制理论,数论以及其他一些重要数学分支都有着非常密切的联系和渗透,伴随着它在其他学科的应用,这一理论已成为现代数学的一个热门分支.为了进一步探讨算子代数的结构,近年来,国内外很多学者都已经对算子代数上的映射进行了深入研究,并不断提出新思路.例如Jordan映射,零点广义可导映射,高阶导子,高阶Jordan
本文,首先介绍了Banach空间中的XdBessel列、Xd框架、Xd—Bessel列、Xd-框架、p阶框架的概念,其次,给出了Xd Bessel列Xd—Bessel列的等价刻画,并系统地研究了Xd Bessel列和Xd—Bessel列的性质.接着,探讨了Xd框架和Xd-框架的存在性,并运用算子理论的方法研究了Xd框架的扰动.最后,对p阶框架的超出量进行了系统的研究.全文共分四章,各章主要内容如下
自从Zadeh于1965年在Information and Control上发表了著名论文"Fuzzy sets",模糊集理论已经在越来越多的具体领域,比如:模式识别、决策、信息融合、医疗诊断、优化控制,得到了广泛而深入的研究且发挥着重要的作用.为了使模糊集理论有着更广泛的应用,人们随后提出了模糊集的各种推广.其中,Atanassov提出了直觉模糊集.它的主要特征是给每个元素设定了隶属度和非隶属度
θ-开集和δ-开集是特殊的开集.本文以此为基础,引入θ-空间、δ-空间、弱θ-连续映射、θ-连续映射、强θ-连续映射、弱δ-连续映射、δ-连续映射、强δ-连续映射等概念并讨论它们的一些相关结果.证明有关θ-开集和δ-开集的一些范畴性质.另外,给出无底闭包空间、代数闭包空间及推理闭包空间的定义.证明有关它们的一些范畴性质.论文的要点及主要内容如下:第1章预备知识.主要介绍本文所涉及的θ-开集、δ-开
逻辑代数是各种逻辑系统研究的一个重要方向,就是用代数的方法研究逻辑问题.目前已有多种成熟的逻辑系统建立.王国俊教授以(?)*-Lindenbaum代数为背景建立了R0代数.R0代数一经建立便受到众多学者关注,其中一个焦点就是R0代数的结构.要研究一个代数系统的结构,很自然的一个出发点就是从该代数中的元素着手,已有众多成果产生:韩诚、吴恒洋利用真布尔元、中点、R0代数的根等概念集中探索了非全序R0代
目前物理学与生物学的结合已成为物理学发展的一个重要分支,生物学研究结构与功能,物理学研究结构与性质。细胞是生命形态结构和生命活动的基本单元,细胞膜是细胞生命活动的必须组分。正确认识生物膜的构形与功能,不仅对揭示生命活动的奥秘有重要意义,而且对解决医学、农业以及工业上的一些实际问题也有重要的指导作用。由于电子显微镜技术在生物学中的应用,人们得以观察到细胞膜的微观结构,提出细胞膜由磷脂双亲分子及其内外
视觉系统在动物通讯中占据着主导地位,其适应进化机制一直是动物行为学研究的焦点。生活在特殊环境中的动物,其视觉系统在进化过程中表现出来的显著差异更是引人注目。甘肃鼢鼠(Myospalax cansus)由于终年生活在地下黑暗的洞道,生活的空间格局对其视觉系统的结构、生理机能产生了深刻的影响。由于长期的适应进化,其视觉系统的形态结构和功能发生了巨大的变化,其中最为显著的是眼变小,视觉退化。研究表明,甘
三角涡虫(Dujesia japonica)是扁形动物门涡虫纲动物,因具有形态学的可塑性及独特的再生能力成为再生生物学、神经生物学和发育生物学研究的模式动物。近年来,涡虫研究进入基因组学和功能基因组学领域,这些研究有助于从基因组水平上揭示后生动物进化、发育和再生的共同机制。本论文应用Clontech公司CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit,
按蚊亚属(Subgenus Anopheles)隶属于蚊科(Culicidae),按蚊亚科(Anophelinae),按蚊属(Genus Anopheles),我国目前已记录有8个种团36种。本研究广泛收集我国按蚊亚属的蚊种,单蚊抽提基因组DNA,扩增和测定mtDNA-COⅡ、mtDNA-COⅠ、rDNA-28S-D3和rDNA-ITS2序列,应用Bioedit V5.0.9、ClustalX1.