副猪嗜血杆菌的分离鉴定及菌体灭活苗的研制

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为了查明导致北疆地区部分规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病的病原及其生物学特性。方法:采集来源于不同地区规模化猪场病死猪的病料,包括肺脏、淋巴结和关节积液等;选择TSA培养基培养,采用10%CO2兼性厌氧条件对细菌分离,根据该菌的16S rRNA来设计引物,采用PCR方法对分离株进行鉴定,然后观察其培养、生理生化、血清学和药敏特性,最后观察分离株对小鼠的致病性。为提高候选株的培养效率,掌握候选株的生长特性,为疫苗菌株的制备提供理论依据。本试验选择基于OD值连续测定的活菌计数法,将候选株接种于TSB培养基上,置于10%CO2培养,对该菌株的OD600值进行测定。鉴于副猪嗜血杆菌血清型众多,商品化疫苗尚未全部覆盖。本试验以不同血清型的菌株作为候选菌株,进行扩大培养,制备菌体灭活苗,同时对该疫苗的物理性状、安全性和免疫保护力进行评价。结果:总共从174份病料中分离到31株分离株,其生理生化、培养及分子特征均符合副猪嗜血杆菌的特性;且分离株的血清型包括1、4、5、12四种;分离株副猪嗜血杆菌对庆大霉素、磺胺异噁唑、土霉素、头孢噻肟、林可霉素和氟苯尼考的耐药率分别为:35%、44%、26%、11%、48%和21%,为进一步控制该地区副猪嗜血杆菌病提供了理论基础;小鼠感染实验结果显示:67%的HPS分离株的致病力较强,可导致实验小鼠死亡;对分离株HZG-6的生长曲线测定结果表明:分离株HZG-6在1621小时内菌液的OD600值迅速升高,并在21 h时达到最大值,然后呈下降趋势。结果揭示,此菌作为疫苗候选种子进行扩大培养的最佳收菌时间为培养后的第21 h。筛选分离株HZG-6(5型)、HZG-11(1型)、HZG-26(12型)这3株不同血清型的分离株,制备副猪嗜血杆菌菌体三价灭活苗。对该疫苗的物理性状和安全性检测,结果显示各性状良好,该疫苗免疫前后的抗体值有明显变化,该疫苗有一定的保护率。结论:本研究共分离31株副猪嗜血杆菌。其中,81%的菌株对环丙沙星、洛美沙星和头孢类药物敏感,制备的三价菌体灭活苗具有一定的保护率。
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