论文部分内容阅读
非酒精性脂肪肝(NAFLD)是除酒精之外多种致病因素引起的病理综合征,目前临床还没有出现可以完全治疗的药物。益生菌及其发酵乳具有调节肠道菌群、抗炎、抗氧化等功效,为改善脂质过氧化,调控NAFLD提供了新思路。本研究以鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳(1301发酵乳)为研究对象,建立NAFLD大鼠模型并利用益生菌发酵乳进行干预,体内探究益生菌发酵乳对NAFLD的改善作用;建立脂肪变性L-02肝细胞模型体外验证益生菌发酵乳的保护作用;采用代谢组学研究策略,从血清代谢水平揭示了益生菌发酵乳对NAFLD的作用机制。主要研究内容如下:1.鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳对大鼠NAFLD的改善作用。建立NAFLD大鼠模型,分为空白组、模型组、1301干预组和1301预防组,测定各组大鼠血清中血脂指标、氧化指标及炎症因子的水平,探究1301发酵乳对大鼠NAFLD的改善作用。结果显示,1301预防组较模型组的体重增加和食物效应比显著下降(P<0.05),分别下降了 20.62%、19.46%;血脂指标显示,1301预防组大鼠血清中TC、TG以及LDL-C含量分别为2.11mmol/L、1.48 mmol/L、0.98 mmol/L,较模型组显著降低了8.65%、16.85%、16.24%(P<0.05),HDL-C 含量为 0.70 mmol/L,显著高于模型组 20.68%(P<0.05);氧化指标显示,1301预防组大鼠血清中AST、ALT、FFA和ROS含量分别为 78.00 U/L、55.00 U/L、1272.17 U/L、381.58 U/mL,较模型组显著降低了 18.75%、21.42%、19.67%、24.65%(P<0.05);炎症因子指标显示,1301预防组较1301干预组显著下调 TNF-α、IL-6、IL-8、TGF-β1、IL-1β和 NF-κB 水平(P<0.05),分别下调了 8.06%、11.31%、10.03%、4.69%、23.60%、22.03%。说明 1301 发酵乳可有效调控脂质代谢,具有抗炎、抗氧化效果,对NAFLD发挥改善作用。2.鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳对脂肪变性L-02肝细胞的保护作用。采用游离脂肪酸诱导L-02肝细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪变性细胞模型。含益生菌发酵乳的大鼠血清作用细胞模型,测定各组细胞活性、细胞内TG和TC含量、培养液转氨酶含量、细胞内ROS含量及细胞凋亡率,观察细胞内脂滴变化,探究1301发酵乳对非酒精性脂肪变性L-02肝细胞模型的保护作用。结果显示,1 mmol/L浓度的FFA诱导L-02肝细胞可成功建立脂肪变性模型。含益生菌的大鼠血清作用细胞模型后,相比模型组,1301预防组细胞活性提高了 3.35%;脂滴变化显示,1301预防组较模型组明显减少了脂滴数量,减轻脂肪变性程度(P<0.05);血脂和转氨酶指标显示,1301预防组TG和AST含量较模型组显著减少(P<0.05),分别减少了 46.40%、15.96%;活性氧和细胞凋亡率结果显示,1301预防组ROS含量占比和细胞凋亡率水平较模型组相对降低了 2.40%和1.46%。说明1301发酵乳可减轻肝细胞损伤和脂质过氧化程度,对NAFLD具有保护作用。3.代谢组学研究鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳对大鼠NAFLD的调控机制。采用UPLC-Q-TOF-MS技术测定大鼠血清中代谢物质,分为空白组(C)、模型组(M)、1301预防组(T),分析血清中关键代谢物质和代谢通路,研究益生菌发酵乳对大鼠NAFLD的作用机理。结果显示,M/C组和T/M组共同检测到30种大鼠血清代谢物,M/C组中检测到19种显著差异代谢物(P<0.05),T/M组中检测到17种显著差异代谢物(P<0.05)。其中有12种差异代谢物因高脂饮食造成水平上调,1301发酵乳干预后有所下调;7种差异代谢物因高脂饮食造成表达下调,经1301发酵乳干预后有所恢复。KEGG通路分析发现M/C组和T/M组共同富集到50条代谢通路,其中有11条代谢通路差异显著(P<0.05),主要分布在脂质代谢、内分泌系统和氨基酸代谢途径中。在M/C组和T/M组中,花生四烯酸代谢通路发生显著变化,共富集到5种显著差异代谢物,是富集代谢物质最多的通路。说明1301发酵乳通过调控代谢通路中的差异代谢物,发挥抗炎、抗氧化特性,减轻肝细胞损伤,对NAFLD具有调控作用。