TLRs是一类重要的模式识别受体,天然免疫细胞通过识别病原微生物中保守的病原体相关分子模式,产生细胞因子和趋化因子,启动天然免疫应答,从而构成了机体免疫反应的第一道防线。然而,TLRs的活化异常或者过分活化,可能使自身免疫疾病恶化,产生如系统性红斑狼疮、内毒素休克和自身免疫等疾病。因此,TLRs信号通路的活化必须得到严密控制。目的：构建Rab5a和Rab9真核表达载体,建立稳定表达Rab5a及其突变体Rab5aN133I的巨噬细胞系,研究Rab5a及其突变体、Rab7及其突变体过表达后对CpG刺激的巨噬细胞中细胞因子的影响。方法：以小鼠巨噬细胞RAW264.7的cDNA为模板,根据GenBank中公布的小鼠Rab5a和Rab9全长序列设计引物,扩增Rab5a和Rab9的开放阅读框,并与真核表达载体pcDNA3.1/Flag(-)B连接,转化后挑取阳性克隆,酶切鉴定后测序。通过脂质体法(?)(?)Rab5a及其突变体Rab5aN133I的真核表达载体转染到RAW264.7细胞中,用G418选择性培养基进行筛选,建立稳定表达Rab5a、Rab5aN133I的细胞系。通过RT-PCR, Real time-PCR和Western Blot方法鉴定稳定表达的细胞系。用CpG刺激稳定表达Rab5a、Rab5aN133I、Rab7及Rab7T22N的细胞系8小时后检测细胞因子的表达量变化。结果：将Rab5a和Rab9的阳性克隆测序后与GeneBank中报道序列的同源性为100%和99%,均不存在突变。RAW264.7转染Rab5a和Rab7真核表达载体后Rab5a和Rab7的表达量明显高于对照质粒转染细胞。Rab5a过表达后,在CpG的刺激作用下巨噬细胞分泌的TNF-α、IL-1β和IFN-β明显升高,而Rab5aN133I过表达后上述细胞因子的分泌均有所恢复。CpG刺激过表达Rab7的细胞,其分泌的IL-6、IL-10及IFN-β显著降低,而Rab7T22N过表达后却促进了上述细胞因子的增殖。结论：成功构建Rab5a和Rab9真核表达载体。建立稳定表达Rab5a、Rab5aN133I的细胞系。Rab5a可能是TLR9信号通路的正向调控蛋白,而Rab7可能是负向调控TLR9信号通路的蛋白。本研究为进一步了解Rab蛋白在TLRs信号转导中的作用奠定了基础。