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目的观察南方红豆杉水提物联合吉非替尼对人肺癌细胞系增殖抑制的作用及对ERK1/2、STAT3信号通路的影响,明确南方红豆杉水提物克服吉非替尼耐药的机制。方法采用水煎剂方式提取南方红豆杉,体外培养的人肺癌细胞株A549、H1975、H820、PC9及其子细胞PC9/R,随机分成空白、南方红豆杉水提物、吉非替尼及南方红豆杉水提物联合吉非替尼组,药物作用细胞后,以MTT法检测各组OD值,计算抑制率及两药合用指数。应用Real-time PCR检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、ERK1/2、STAT3 mRNA 表达水平。免疫印迹法(Western-blotting)检测 EGFR、ERK1/2、STAT3、p-STAT3、p-EGFR、p-ERK1/2蛋白表达水平。各组间差别的单因素方差分析用SPSS19.0软件处理。结果1.MTT检测法:南方红豆杉水提物及吉非替尼对人肺癌细胞株A549、H1975、H820、PC9及其子细胞PC9/R增殖抑制明显,处理72h后OD值与对照组比较存在显著性差异(P<0.01),且各肿瘤细胞株的半数抑制率(IC50)有差别,表明各肿瘤细胞对药物敏感性存在差异。其中PC9/R、H1975、H820、A549的IC50值明显大于PC9细胞,得出PC9/R、H1975、H820、A549细胞株为吉非替尼耐药细胞株,PC9细胞为敏感细胞株。用0.25mg/ml浓度的南方红豆杉水提物联合不同浓度的吉非替尼(其中PC9R、A549、H1975、H820 细胞株吉非替尼浓度分别为 1、3、6、9、12、15、18、30μmol/L,PC9细胞吉非替尼浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.1、0.5、1、5、10μmol/L)作用于不同细胞,均呈现出较单药更为显著的细胞增殖抑制作用(与吉非替尼单药相比,P<0.05),表明两药具有协同作用,但是当联合组中吉非替尼浓度继续增高时,药物杀伤力并未明显升高。2.Real-time PCR检测法:与吉非替尼组相比,5种细胞株联合组中的EGFR mRNA表达均有下调(P<0.05),PC9/R细胞株联合组中的STAT3mRNA表达下调(P<0.05),A549、PC9、PC9/R 细胞株联合组 ERK1/2 mRNA 表达轻度下调(P<0.05);H1975、H820、PC9、A549 细胞株的 STAT3 mRNA,H820、H1975 细胞株的 ERK1/2 mRNA 在联合组中无明显变化。与对照组相比,5种细胞的EGFR、STAT3、ERK1/2mRNA表达均降低(P<0.05)。3.Western-blotting 检测法:与吉非替尼组相比,A549、H1975、H820、PC9、PC9/R细胞株联合用药组p-STAT3表达均有一定程度的下调(P<0.05),STAT3蛋白表达变化则无统计学差异;5种细胞株的p-EGFR蛋白表达在联合组中有明显下调(P<0.05),H1975、H820、PC9/R细胞株的EGFR蛋白在联合组中轻度降低,A549、PC9细胞株的EGFR无明显变化;H1975、H820、PC9/R、A549细胞株的p-ERK1/2蛋白在联合组中有一定程度下调(P<0.05),PC9细胞株的p-ERK1/2变化无统计学差异。结论1.南方红豆杉水提物和吉非替尼两药联合能增强抑制人肺癌细胞系增殖的作用。2.南方红豆杉水提物可能通过下调EGFR及抑制其下游信号通路ERK1/2、STAT3而起到克服吉非替尼耐药,抑制肿瘤的作用。