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背景:结核病（Tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium Tuberculosis,Mtb）感染引起的慢性疾病,可侵犯人体多个组织器官。据世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估算,中国肺结核病原学诊断比例约55%。在无法获得病原学证据时,在临床发热患者中诊断活动性结核病（Active tuberculosis,ATB）患者仍然面临挑战,免疫学检查是结核诊断学研究领域的热点,通过增加新的抗原刺激或检测多种细胞因子,对鉴别结核感染状态具有重要意义。目的:1.比较 QuantiFERON-TB Gold Plus（QFT-Plus）和 T-SPOT.TB 在结核高负担国家发热患者中诊断ATB的准确性。评价QFT-Plus鉴别诊断ATB与非活动性Mtb感染的临床应用价值;分析QFT-Plus和T-SPOT.TB阳性结果的影响因素。2.探索 QFT-Plus、6kD 早期分泌 靶 向抗原（Early secreting antigen target-6,ESAT-6）、10kD 培养过滤蛋白（Culture filtrate protein-10,CFP-10）、Rv2028c、Rv1733cSLP抗原刺激后 ATB、潜伏性结核感染（latent tuberculosis infection,LTBI）、非活动性结核病（Inactive TB）、未感染健康对照（Healthy Control,HC）的γ干扰素（Interferon gamma,IFN-γ）,肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）,白介素2（Interferon-2,IL-2）,白介素 5（Interferon-5,IL-5）,白介素 6（Interferon-6,IL-6）,白介素 10（Interferon-10,IL-10）,干扰素诱导蛋白 10（Interferon-inducible protein-10,IP-10）,白细胞介素 1 受体拮抗剂（Interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra）,CXC趋化因子配体1（CXC chemokine Ligand-1,CXCL-1）和单核细胞趋化蛋白-1（Macrophage chemoattractant protein 1,MCP-1）细胞因子水平差异,筛选具有鉴别MTB感染状态潜力的备选抗原和细胞因子。方法:第一部分:QuantiFERON-TB Gold Plus和T-SPOT.TB在发热患者中对活动性结核病的诊断价值采用病例对照研究设计。2020年4月至2021年7月,纳入北京协和医院和北京胸科医院病原学诊断和临床诊断的ATB患者作为病例组,纳入同一时期在北京协和医院就诊最终排除ATB的发热患者作为对照组。同时检测QFT-Plus和T-SPOT.TB,评价两种检测方法检测结果的一致性,诊断ATB的灵敏度、特异度、预测值和似然比,评价QFT-Plus鉴别诊断ATB与非活动性Mtb感染的准确性;采用多因素logistic回归分析两种检测方法阳性结果的影响因素。第二部分:结核分枝杆菌抗原特异性多细胞因子免疫应答鉴别不同结核感染状态的探索性研究纳入2022年2月至2022年4月在北京协和医院和北京胸科医院病原学诊断ATB的患者,LTBI、Inactive TB和HC的健康人群。使用QFT-Plus TB1、TB2抗原,毒力因子ESAT-6,CFP-10和Mtb潜伏期抗原Rv1733c SLP、Rv2028c进行全血刺激检测。应用Luminex平台检测血浆中的细胞因子水平（IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-6,IL-10,IL-5,IP-10,IL-1Ra,CXCL-1和MCP-1）,比较不同抗原刺激后不同组别受试者细胞因子分泌水平差异,筛选具有鉴别MTB感染状态潜力的备选抗原和细胞因子。结果:第一部分:QuantiFERON-TB Gold Plus和T-SPOT.TB在发热患者中对活动性结核病的诊断价值1.QFT-Plus 和 T-SPOT.TB 出现不确定结果（Indeterminate results,ITRS）的比例分别为 3.3%vs 0。2.QFT-Plus 和 T-SPOT.TB 检测结果的一致性较好（kappa=0.61,p＜0.001）。3.QFT-Plus 和 T-SPOT.TB 诊断 ATB 的受试者工作特征曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC curve）下面积分别为 0.792 vs 0.849（p=0.07）。QFT-Plus 和T-SPOT.TB诊断病原学确诊ATB的敏感性为93.1%vs 96.6%。4.T-SPOT.TB 阳性结果的影响因素为男性,[odds ratio（OR）2.4,95%confidence interval（CI）1.3-4.4,p=0.004],存在陈旧性结核证据[OR 11.3（95%CI 4.6-27.6）,p＜0.001],而 QFT-Plus 阳性结果的影响因素除男性[OR 3.2（95%CI 1.7-5.8）,p＜0.001]和存在陈旧性结核证据[OR 7.58（95%CI 3.60-15.98）,p＜0.001]以外,还与应用免疫抑制药物[OR 0.49（95%CI 0.26-0.94）,p=0.03]相关。5.QFT-Plus抗原TB2-TB1鉴别诊断ATB和非活动性Mtb感染的AUC为0.576（95%CI 0.477-0.674,p=0.138）。第二部分:结核分枝杆菌抗原特异性多细胞因子免疫应答鉴别不同结核感染状态的探索性研究1.QFT-Plus TB1、TB2抗原刺激后ATB组、LTBI组分泌IFN-γ水平均显著高于HC组（p＜0.05）,但 ATB 与 LTBI 组间 IFN-γ水平无显著差异（p＞0.05）。IL-2,IL-1Ra,CXCL-1等细胞因子,与IFN-γ具有相似的分泌模式。此外,TB1抗原刺激后ATB组IP-10水平显著高于LTBI组、既往结核病组和HC组（p＜0.05）,TB2抗原刺激后ATB组IL-6水平显著高于LTBI组和HC组（p＜0.05）。QFT-Plus TB1、TB2抗原分泌细胞因子的差值（TB2-TB1）在各组间多无显著差异。2.ESAT-6 抗原刺激后 ATB 组 IL-6、IP-10、IL-1Ra、CXCL-1 水平显著高于 LTBI组、Inactive TB 组和 HC 组（p＜0.05）。CFP-10 抗原刺激后 ATB 组 IL-6、IP-10、IL-1Ra、CXCL-1、MCP-1 水平显著高于 Inactive TB 组和 HC 组（p＜0.05）。3.Rv1733cSLP抗原刺激后ATB组IFN-γ和IL-2水平显著低于LTBI组（p＜0.01）,ATB 组 IL-6 和 CXCL-1 水平显著高于 LTBI 和 Inactive TB 组（p＜0.01）。Rv2028c 抗原刺激后ATB组IFN-γ和IL-2水平显著低于LTBI组（p＜0.01）,ATB组CXCL-1水平显著高于LTBI组（p＜0.05）。结论:1.QFT-Plus和T-SPOT.TB在发热患者中诊断ATB准确性无显著差异,QFT-Plus较易出现不确定结果。2.QFT-Plus和T-SPOT.TB的阳性结果与男性和存在陈旧性结核证据相关。QFT-Plus的结果还受应用免疫抑制药物影响。3.除IFN-γ外,QFT-Plus检测IL-2,IL-1Ra,CXCL-1等细胞因子水平有助于提示结核感染,联合检测IP-10、IL-6水平,可能具有鉴别ATB与LTBI的潜力。4.在Mtb毒力因子ESAT-6＆CFP-10的基础上,联合Rv1733cSLP/Rv2028c检测IFN-γ、IL-6、IP-10、IL-1Ra、CXCL-1、IL-2可能用于鉴别结核感染的不同状态。