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第一部分脊髓Ror2通过调节星形胶质细胞极化参与开胸术后慢性疼痛背景和目的开胸术后慢性疼痛(Chronic post-thoracotomy pain,CPTP)严重影响患者的术后恢复和生活质量且机制不明。受体酪氨酸激酶样孤儿受体2(Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2,Ror2)在神经元可塑性与神经病理性疼痛有着作用,并可调节急、慢性疼痛的形成。活化的星形胶质细胞参与慢性疼痛的发生发展,活化的星形胶质细胞可分为神经毒性A1型和神经保护性A2型,但关于A1/A2型星形胶质细胞在CPTP发生发展中的作用知之甚少。本课题组前期研究显示,CPTP大鼠的背根神经节中,Ror2和GFAP(Glial fibrillary acidic protein,神经胶质纤维酸性蛋白)表达增加。本研究拟进一步探讨脊髓背角(Spinalcorddorsalhorn,SDH)Ror2和星形胶质细胞极化在CPTP发生发展过程中的作用及其可能机制。方法参照Buvanendron方法建立CPTP大鼠模型,在开胸术前1 d(基线值)和术后第 1、3、5、7、10、14、18、21 d 使用机械痛阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)和冷痛阈值评估大鼠的疼痛行为,分为Naive组、Sham组、CPTP组和non-CPTP组。术后第7、14、21 d收集开胸侧第四到第五胸段的SDH,进行GFAP、S100A10、C3、Ror2、c-JUN和C3aR的免疫蛋白印迹和免疫荧光检测。开胸术前21 d鞘内注射腺相关病毒AAV-GFAP-Mir30-Ror2抑制星形胶质细胞Ror2表达和空白对照病毒AAV-GFAP-NC,观察星形胶质细胞Ror2敲低对CPTP大鼠疼痛行为及脊髓背角星形胶质细胞GFAP、S100A10、C3、Ror2、c-JUN和C3aR表达的影响。结果CPTP大鼠发生机械痛觉过敏和冷痛觉过敏。与Sham组相比,CPTP组大鼠SDH中GFAP、C3、Ror2、c-JUN和C3aR表达从术后第7 d开始增加,持续至术后第21 d,而S100A10表达则从术后第7 d开始减少,持续至术后第21 d。CPTP组大鼠SDH术后第21 d的GFAP、C3、Ror2、c-JUN和C3aR表达水平较Naive组、Sham组和non-CPTP组显著增加,而S100A10表达水平则较其它三组显著减少。免疫荧光结果显示,CPTP组SDH星形胶质细胞C3、Ror2、c-JUN和C3aR表达增加,而S100A10表达减少,且活化的星形胶质细胞主要为A1型。开胸术前敲低脊髓星形胶质细胞Ror2表达可减轻CPTP大鼠的机械痛觉过敏和冷痛觉过敏,且显著降低 CPTP 的发生率。与 AAV-GFAP-NC-CPTP-POD 14 组相比,AAV-GFAP-Mir30-Ror2-CPTP 组 SDH 的 C3、Ror2、c-JUN 和 C3aR 在术后第 7、14、21 d 表达下调,但S100A10表达上调,活化的星形胶质细胞主要为A2型。结论在CPTP大鼠的SDH,Ror2、c-JUN和C3aR表达上调,活化的星形胶质细胞主要为A1型。脊髓星形胶质细胞Ror2可能通过调节c-JUN和C3aR表达介导CPTP大鼠A1/A2型星形胶质细胞极化。第二部分Ror2通过调节前扣带回星形胶质细胞极化及CCL2和CXCL1表达参与开胸术后慢性疼痛背景和目的开胸术后慢性疼痛(Chronic post-thoracotomy pain,CPTP)与炎性疼痛、神经病理性疼痛、外周敏化和中枢敏化相关,但确切发病机制仍不明确,故目前尚无有效防治措施。在炎性痛模型和神经病理性痛模型中的前扣带回(Anterior cingulate cortex,ACC)GFAP表达增加,抑制ACC星形胶质细胞的活化可缓解慢性疼痛相关行为。星形胶质细胞分泌的趋化因子CCL2、CXCL1可通过调节外周与脊髓感觉神经元的兴奋性及介导神经元和胶质细胞相互作用等方式参与慢性疼痛的发生发展。第一部分研究结果显示,Ror2通过调节脊髓星形胶质细胞极化参与CPTP形成发展,本研究拟通过建立CPTP大鼠模型,观察ACC星形胶质细胞活化和极化以及趋化因子CCL2、CXCL1表达情况,进一步探讨ACC部分Ror2和星形胶质细胞极化对CPTP发生发展的作用。方法参考Buvanendron方法建立CPTP大鼠模型,在开胸术前1 d(基线值)和术后第 1、3、5、7、10、14、18、21d 使用机械刺激伤害感受阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)和冷痛阈值评估大鼠的疼痛行为,从而将大鼠分为Naive组、Sham组、CPTP组和non-CPTP组。分别于术后第7、14、21 d收集大鼠ACC组织进行免疫蛋白印迹,比较GFAP、S100A10、C3、Ror2、CCL2和CXCL1随时间的表达趋势。免疫荧光共染S100A10、C3、Ror2、CCL2、CXCL1和GFAP,观察其在ACC星形胶质细胞的表达情况。开胸术前21 d鞘内注射腺相关病毒AAV-GFAP-Mir30-Ror2(敲低星形胶质细胞Ror2表达)和空白对照病毒AAV-GFAP-NC,观察星形胶质细胞Ror2对CPTP大鼠疼痛行为及ACC部分GFAP、S100A10、C3、CCL2、CXCL1表达的影响。结果与 Sham 组相比,CPTP 大鼠 ACC 部位 GFAP、C3、Ror2、CCL2 和 CXCL1 在术后第7、14、21 d表达增加,而相应时间点S100A10表达则减少。与Naive组、Sham 组和 non-CPTP 组相比,CPTP 大鼠 ACC 部位 GFAP、C3、Ror2、CCL2 和CXCL1在术后第21d表达显著增加,但S100A10表达显著减少。免疫荧光结果显示,CPTP组ACC部位星形胶质细胞C3、Ror2、CCL2和CXCL1表达增加,而S100A10表达减少,活化的星形胶质细胞主要为A1型。开胸术前敲低ACC星形胶质细胞Ror2表达可改善CPTP大鼠机械痛觉过敏和冷痛觉过敏,并且显著降低CPTP 的发生率。与 AAV-GFAP-NC-CPTP-POD 21 组相比,AAV-GFAP-Mir30-Ror2-CPTP组ACC部位C3、Ror2、CCL2和CXCL1在术后第7、14、21 d表达下调,而S100A10表达则上调,活化的星形胶质细胞主要为A2型。结论CPTP大鼠ACC部位Ror2、CCL2、CXCL1表达上调,并且活化的星形胶质细胞主要为A1型,而ACC部位Ror2可通过调节星形胶质细胞极化和CCL2、CXCL1的表达介导CPTP的发生和发展。