本研究以犬源巴贝斯虫为对象,对其进行了形态学观察和具有分类鉴定意义的18S rRNA基因序列扩增和系统进化分析,并基于18S rRNA基因序列特征建立了PCR检测方法,开展了流行病学调查。　　 对采集的临床疑似巴贝斯虫感染犬的血样制成血液涂片,血片经姬姆萨染色后通过普通光学显微镜观察发现,位于红细胞内的巴贝斯虫,虫体呈梨籽形、逗点形等,虫体大小为2-4μm,染虫红细胞内可发现单个、成对或多个虫体存在。　　 对临床采集的血样进行全血基因组DNA抽提,作为PCR反应是模板。根据文献Birkenheuer et al(2003)报道,选择能扩增多种巴贝斯虫几乎全长的18S rRNA基因的引物5-22F/1661R,进行PCR扩增。将扩增产物纯化并连接到质粒载体pMD18-T,克隆转入感受态细胞DH5α,挑选阳性克隆扩菌培养,并进行菌液PCR鉴定,将阳性菌液送上海英骏生物工程有限公司(广州实验室)测序。测序结果表明,扩增的18SrRNA基因片段大小为1677 bp,与预期目的片段的长度一致,序列同源性和系统发育分析显示,该犬源巴贝斯虫18S rRNA基因与韦氏巴贝斯虫(Babesia vogeli)的相似性最高为99.9％～100%,系统进化树中与其他犬巴贝斯虫处于同一分支,可以确定其属于韦氏巴贝斯虫(B.vogeli),首次从分子水平证明了犬的韦氏巴贝斯虫在我国的存在。　　 根据文献Birkenheuer et al(2003)报道的能扩增出大小为340 bp的犬源巴贝斯虫18S rRNA基因的引物455-479F/793-772R,通过以阳性参照为模板进行检测反应的优化、特异性和敏感性实验,建立了PCR检测方法并开展临床样品的检测。特异性实验表明,该PCR检测方法能特异性扩增出巴贝斯虫阳性模板,但与猪附红细胞体、鼠源梨形虫、鸡艾美耳球虫、猪鞭虫、犬附红细胞体、猫血巴尔通氏体等6种寄生虫基因组DNA无交叉反应。敏感性实验表明,最低能检测到79fg的阳性参照DNA。　　 用建立的PCR检测方法对采集自广州、深圳、佛山、清远的281份临床样品进行检测,5份为阳性,阳性率为1.78%,比传统检测方法多出3份,显示出该PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性。采用半巢式PCR的4对引物对5份阳性样品进行犬巴贝斯虫的种特异性鉴定,其中4份为B.vogeli感染,1份为吉氏巴贝斯虫(B.Gibsoni)感染,无犬巴贝斯虫(Babesia canis)和罗氏巴贝斯虫(Babesia rossi)感染,也无混合感染情况。犬群中B.vogeli的阳性率为1.42%(4/281),B.gibsoni感染的阳性率为0.36%(1/281)。