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本文选用生长速度快、对应激反应敏感性较高的Arbor Acres肉鸡(简称AA肉鸡)作为试验动物,通过三个方面的试验,系统地探讨了外源添加RRR-α-生育酚琥珀酸酯(D-TOS)对肉鸡的免疫与抗氧化功能、肉品质及对免疫应激肉鸡免疫反应的调控、对肠道黏膜氧化损伤、细胞凋亡和黏膜免疫反应的调控和保护作用,并同时设立人工合成all-rac-a-生育酚醋酸酯(DL-TOA)或天然α-生育酚醋酸酯(D-TOA)作为对照组进行比较。其一,研究D-TOS对肉鸡的生长发育、免疫与抗氧化性能及肉品质的影响。从细胞、体液免疫及神经内分泌角度探讨其免疫性能。选用1日龄AA肉鸡320只,随机分为4个处理,分别在基础日粮中添加30mg/kg DL-TOA(对照组)及D-TOS 10 mg/kg (TOS1 组)、30 mg/kg (TOS2组)和50ng/kg (TOS3组),试验期42 d. MTT法测定脾脏T、B淋巴细胞转化率(LTR),比色法测定血清和肝脏组织抗氧化酶活性、α-TOH和丙二醛(MDA)的含量,放射免疫法测定血清中T3、T4和TSH水平,DCHF-DA荧光探针标记法测定肝脏细胞中ROS水平。结果显示：(1)生产和免疫性能方面,各组间的生产性能无显著差异(P>0.05)；TOS3组的脾脏指数比对照组(21 d,42 d)有显著提高(P<0.05),该组的胸腺指数(21d)和法氏囊指数(42 d)与TOS1组相比也有显著提高(P<0.05)；22 d和28 d时,TOS2和TOS3组的新城疫抗体效价显著高于其他各组(P<0.05),同时,TOS3组的禽流感抗体效价显著高于TOS1组(P<0.05)；21 d时TOS3组的B淋巴细胞增殖率高于TOS1组(P<0.05),42 d时TOS3和TOS2组也较对照组和TOS1组有显著提高(P<0.05)；42 d时血清GSH浓度在TOS3组最高(P<0.05),与其他组相比,肝脏GSH浓度也在TOS2和TOS3组有显著提高(P<0.05)；添加30和50 mg/kg D-TOS对肉鸡血清中T3、T4和TSH水平有一定的提高作用；(2)抗氧化功能和肉品方面,相关性分析结果表明,肉鸡日粮中D-TOS水平与血清(R2=0.9831,P<0.01)和肝脏(R2=0.9336,P<0.05)中a-TOH的含量呈显著正相关,与血清(R2=-0.9487,P<0.05)和肝脏(R2=-0.9901,P=0.0518)MDA呈负相关；与对照组和TOS1组相比,日粮中添加30～50mg/kg D-TOS能够使血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)和肝脏的T-SOD活性及T-AOC均有不同程度地提高(P<0.05或P<0.01),同时肝脏活性氧(ROS)水平也有显著降低(P<0.05)；肉品方面,日粮中添加30-50 mg/kg D-TOS显著降低了肉鸡胸腿肌的滴水损失(48 h)和剪切力,及腿肌的烹饪损失(P<0.05或P<0.01)其二,研究D-TOS对免疫应激肉鸡细胞免疫反应与抗氧化功能的影响,及D-TOS对炎性细胞因子表达的调控,旨在从蛋白水平探讨其缓解免疫应激及调控免疫反应的相关作用机制。从抗氧化和非抗氧化角度研究了D-TOS缓解LPS诱导的肉鸡急性免疫应激反应,并深入探讨D-TOS依赖于蛋白激酶C (PKC)和NF-κB途径的作用机制及抑制炎性细胞因子表达的调控作用。288只1d AA肉鸡,采用2×4因子试验设计,即日粮类型(30 mg/kg DL-TOA或10、30和50mg/kg的D-TOS)和免疫应激处理(注射LPS或生理盐水),试验期21 d。在第16 d,每日粮处理中一半的肉鸡肌肉注射250μg/kg BW的LPS,另一半注射等量的生理盐水作为对照,在18d和20 d按首次剂量在相同时间重复注射。最后一次注射后2-4 h内宰杀。脾脏T和B LTR、血清和肝脏组织抗氧化指标(α-TOH、GSH和MDA)含量及肝脏细胞中ROS水平的测定同上所述。放射免疫法测定血清中皮质醇(Cort)和前列腺素E2(PGE2)的含量及血清和脾脏组织中细胞因子,干扰素-γ(IFN-γ)、白介素(IL)-1β、IL-2、IL-6和IL-4、IL-10含量,荧光免疫组化法观察肝脏和脾脏核转录因子NF-κB表达和定位,蛋白免疫印迹法检测肝脏和脾脏NF-κB及其上游的I-κBα表达,ELISA检测肝脏和脾脏PKC活性,并观察肝脏和脾脏组织病理学变化。结果显示：(1)在细胞免疫反应、抗氧化功能与组织学方面,30或50 mg/kg的D-TOS能够在一定程度上增加LPS诱导的氧化应激肉鸡脾脏T和B LTR、血清和肝脏组织中a-TOH水平、GSH-Px活性和GSH浓度,并降低MDA、SOD和血清Cort、PGE2含量；组织形态学观察结果也表明,肝脏和脾脏组织的免疫应激损伤程度有所减轻；(2)细胞因子及其相关机制探讨,与各LPS(-)组相比,LPS刺激使肉鸡血清和脾脏组织细胞因子含量、肝脏ROS水平及肝脏和脾脏组织PKC活性均有显著提高；在各LPS(+)组,肉鸡日粮中添加50 mg/kg D-TOS对血清和脾脏组织IFN-γ、 (IL)-1β、IL-2、IL-6、 IL-4、 IL-10含量及肝、脾脏PKC活性有显著的降低作用(P<0.05或P<0.01); 30 mg/kg D-TOS对血清IL-2、IL-4、IL-6和脾脏组织IL-2、IL-6、IL-10含量、脾脏组织PKC活性及肝脏ROS水平有显著的降低作用(P<0.05或P<0.01)；同时,50 mg/kg D-TOS能够通过减少IκBα的降解,防止NF-κB的过度激活。其三,探讨D-TOS对肉鸡肠道黏膜氧化损伤的保护作用,对肠黏膜上皮细胞凋亡及黏膜免疫反应的影响。从氧化还原平衡状态及细胞凋亡的线粒体途径的角度探讨D-TOS对肠黏膜保护作用的机制。600只1 dAA肉鸡,采用2×5因子设计,即2种油脂类型(新鲜油脂和氧化酸败油脂),以及5种α-TOH的不同处理,分别为30 mg/kg DL-TOA.30 mg/kg D-TOA及15.30.60 mg/kg D-TOS(D-TOS1.D-TOS2和D-TOS3).于试验结束时(42d),测定血清α-TOH和脂质过氧化物(LPO)含量,及空肠和十二指肠黏膜组织匀浆液中LPO水平,及抗氧化损伤相关酶的活性。另外,分别取部分十二指肠和空肠组织固定用于制作电镜超薄切片观察细胞的超微结构及TUNEL染色观察细胞凋亡,测定肠黏膜线粒体中Na+/K+-ATP酶活性、细胞色素C(Cyt C)含量及黏膜匀浆液中细胞凋亡蛋白酶半胱天冬酶-3(Caspase 3)和髓过氧化物酶(MPO)活性、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1).IL-10和分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量。结果显示：(1)与新鲜油脂组相比,氧化酸败油脂导致肉鸡1-21 d的料重比(F/G X P=0.001)增加,并降低了血清和肠黏膜线粒体中α-TOH的含量(P=0.001)、空肠和十二指肠黏膜组织GSH含量(P=0.001；P=0.001)及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)(P=0.0001；p=-0.0001).GSH-Px(P=0.598:p=-0.009)和SOD(P=0.002；P=0.029)的活性,线粒体膜的活力和流动性及Na+/K+-ATP的活性也有降低,导致Cyt C由线粒体中释放；同时空肠和十二指肠黏膜组织过氧化氢酶(CAT)(P=0.001；P=0.0001)活性和LPO(P=0.004:p=-0.03)含量增加,Caspase-3活性升高(P=0.001),结合TUNEL观察结果,提示细胞凋亡率有显著增加(P=0.001)；此外,氧化酸败油脂增加了空肠和十二指肠黏膜sICAM-1(P=0.022:P=0.001).IL-10含量及MPO活性,降低了sIgA的水平(P=0.001:P=0.001)；(2)氧化酸败油脂处理各30 mg/kg不同a-TOH剂型间,与DL-TOA组相比,D-TOA和D-TOS组的十二指肠黏膜的LPO含量、细胞凋亡率及十二指肠Caspase-3的活性(P<0.05或P<0.01)有显著降低,而血清和线粒体a-TOH、十二指肠的GSH含量及膜的流动性有显著提高(P<0.05或P<0.01),D-TOA和D-TOS组的空肠和十二指肠sIgA含量也有显著性(P<0.05)提高；(3)氧化酸败油脂处理各D-TOS组间,与15 mg/kg组相比,30或60 mg/kg组显著提高了血清a-TOH含量,黏膜线粒体α-TOH.CytC含量,及Na+/K+-ATP酶活性(空肠),空肠和十二指肠GSH.sIg A含量、GSH-Px和SOD活性,并显著降低了空肠和十二指肠LPO和IL-10含量、CAT和MPO活性(P<0.05或P<0.01),及肠黏膜上皮细胞的凋亡率及十二指肠Caspase-3活性(P<0.05或P<0.01)；30和60 mg/kg组在α-TOH含量、细胞凋亡率及空肠和十二指肠sIgA含量上亦有显著差异(P<0.05)；(4)透射电镜观察结果表明,氧化酸败油脂可致小肠上皮微绒毛变短变细,排列稀疏,黏膜上皮细胞线粒体空泡化,嵴排列紊乱,细胞结构紊乱等现象,而60 mg/kg D-TOS处理组可明显减轻细胞损伤,及其诱导的细胞凋亡。综上所述,主要得出以下结论：1.日粮中添加30-50 mg/kg D-TOS对正常生理状态下肉鸡的免疫性能提高有一定的促进作用,且能够在一定程度上提高机体的抗氧化功能、肌肉的系水力和嫩度,其原因主要是a-TOH在血清和肝脏中含量的提高,及MDA和肝脏ROS水平的降低。2.30-50mg/kg的D-TOS对免疫应激的缓解作用不是通过抑制免疫系统的活性实现的,而是通过提高a-TOH的携带能力和利用效率,平衡机体氧化还原稳衡动态,并可能通过降低PKC的活性及降低炎性细胞因子的分泌,减弱ROS的第二信使作用,减少IκBa的降解,从而抑制NF-κ.B的过度激活,进而抑制炎症反应。3.氧化酸败油脂可经由氧化应激途径诱导试鸡肠道黏膜上皮细胞凋亡率明显增加,30或60mg/kg D-TOS能提高线粒体对a-TOH的吸收利用率,通过改善细胞的氧化还原平衡状态及线粒体膜的结构和功能,进而增强对肠道黏膜氧化损伤的保护作用,最终抑制细胞的过度凋亡；此外,还可通过降低MPO活性,抑制sICAM-1和IL-10的表达,降低中性粒细胞浸润介导的炎症反应,增加sIgA分泌,从而起到对肠道黏膜免疫反应的调节作用。