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转染技术是将外源的遗传物质(质粒、DNA、mRNA、siRNA、microRNA等)穿过细胞膜导入真核细胞的过程,是研究外源遗传物质在细胞内表达的一种重要手段。转染可分为瞬时转染(瞬转)和稳定转染(稳转),瞬转即将外源基因导入细胞内但不整合到宿主细胞的基因组内,外源基因在细胞分裂时不会被复制,而是会随着细胞的分裂而慢慢丢失,因此瞬转的外源基因只会在宿主细胞的表达几天,随着外源基因的丢失而终止表达。可在短时间内获得可供研究的抗体样品,从而在抗体药物研发的早期阶段非常适用。稳转则是使外源遗传物质整合到细胞的基因组中,随着细胞基因组的复制而复制扩增,通常作为获得抗体药物生产细胞株手段。PEI是一种阳离子聚合物,是近年发展迅速的高效非病毒载体之一,具有经济实惠,转染效率高,细胞毒性低,转染方法操作简单,转染的重复性好等优点,培养基可含或不含血清,可以用PBS或不含血清的培养基稀释DNA进行转染,转染过程中不需换液,适用于大多数常用细胞系。HEK293细胞,人胚肾上皮细胞,容易生长和转染已被广泛地应用于细胞生物学研究。它们还用于由生物技术工业生产治疗性蛋白质和病毒用于基因治疗。HEK293 PEAK rapid具有细胞生长快,贴壁不牢等特点,可以在无钙离子环境下生长,易于驯化为无血清悬浮培养,可以用来瞬转表达蛋白以备科学研究所用。本文将HEK293 PEAK细胞用Free style 293 expression medium进行无血清悬浮驯化培养,成功获得无血清悬浮培养的HEK293 PEAK细胞,经有限稀释法获得HEK293 PEAK细胞亚克隆,建立抗体瞬转表达的工程细胞株。用转染试剂PEI将质粒转入该细胞株中表达抗体。通过优化抗体质粒与转染试剂PEI的比例,质粒与转染试剂的比例为1：2时,抗体质粒转染效率最佳,并对瞬转表达抗体进行鉴定和活性分析,获得有生物活性的抗体。结果表明成功建立了无血清悬浮培养的HEK293 PEAK细胞瞬转快速表达抗体蛋白的平台。