论文部分内容阅读
目的：观察miR-122在二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine, DEN)和微囊藻毒素-LR (Microcystin-LR, MC-LR)诱导大鼠肝癌形成过程中变化,通过分析miR-122与AFP、P53、ADAM17关系,探讨miR-122在肝癌中的意义。方法：将75只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组,二组均喂养标准大鼠饲料。模型组用二乙基亚硝胺和微囊藻毒素-LR建立大鼠肝癌模型：0.25%DEN溶液(10mg/kg)+MC-LR (20ug/kg)腹腔注射,1次/5天,至16周停止。肝癌形成过程大致可分为三个期,诱癌4周时为肝细胞损伤期,8周至12周时为肝细胞增生-硬化期,16至20周时为肝细胞癌变期；同时,对照组注射生理盐水。对照组和模型组于第4周、8周、12周、16周、20周分别随机抽取5只、10只大鼠处死。称量大鼠体重及肝重,计算肝指数；眼眶取血,测量各期ALT、γ-GT、TBIL水平；荧光定量PCR获得miR-122水平,肝组织病理检查, Western Blot技术定量检测8周至20周肝组织AFP、p53、 ADAM17水平。结果：1.二乙基亚硝胺+微囊藻毒素-LR诱癌8-12周出现肝硬化,16周以后成功诱导肝硬化伴发原发性肝癌,16周时成癌率为5/7,20周是成癌率为6/6,总体死亡率为10/30；对照组大鼠生长良好,无异常死亡。2.大鼠肝癌模型一般情况：模型组在各个时期肝体重指数,丙氨酰氨基转移酶、γ-谷氨酰转肽酶、总胆红素均较对照组高,且具有统计学意义(P<0.05)。3. MiR-122在肝癌模型表达情况：qRT-PCR检测显示miR-122在肝癌诱发过程中呈逐渐下降趋势,且每个时期与对照组存在显著性差异(P<0.05),但是在肝硬化时期,8周和16周无明显差异(P>0.05)。4.肝癌组织中AFP、p53、ADAM17的表达：Western Blot检测8周至20周肝组织中AFP、p53、ADAM17表达水平,AFP在肝硬化时期出现升高,在20周时达到高峰,组内存在显著性差异(P<0.05)；20周时P53、ADAM17较16周时明显升高,且具有统计学意义(P<0.05)。结论：1.MC-LR+DEN是比较理想的大鼠肝癌模型诱发方式,具有稳定性、安全性的特点。2.MiR-122在MC-LR+DEN诱发的大鼠肝癌形成过程中是逐渐下降的,对肝癌具有一定的诊断价值；且miR-122可能与肝癌的预后相关,表达量越低预后越差。3.MiR-122可能通过参与靶点P53、ADAM17调节,抑制其表达而发挥抑癌作用。