长链非编码RNA H19在喉鳞状细胞癌中的生物学作用及机制

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喉鳞状细胞癌(LSCC,Laryngeal squamous cell cancer)具有高度侵袭性,是一种严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤。长链非编码RNA(Lnc RNA,Long non-coding RNA),长度大于200nt,具有复杂的生物学功能。研究发现Lnc RNA H19在多种肿瘤疾病的发生及发展中发挥重要的作用,然而H19在喉鳞状细胞癌中如何发挥作用尚未见报道,因此我们想研究H19在喉癌中的作用及其发挥作用的机制。方法在喉鳞癌细胞中下调H19的表达,并研究下调H19对喉鳞癌细胞迁移、侵袭及增殖的影响。构建裸鼠喉鳞癌移植瘤模型,研究在体内下调H19对喉鳞癌细胞生长的影响。然后,基于序列互补原则,我们利用star Base数据库预测H19的靶基因。从公共数据库提取喉鳞癌基因表达谱数据,应用皮尔森相关性分析研究H19表达和mi R-148a-3p表达两者之间的关系。在Hep-2细胞中,通过转染过表达mi R-148a-3p和携带mi R-148a-3p干扰序列的载体来调控mi R-148a-3p的表达。并应用划痕实验,transwell实验和MTS实验研究mi R-148a-3p过表达或下调对喉鳞癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。应用Target Scan和mi Randa数据库预测mi R-148a-3p靶基因。应用荧光素酶报告基因实验验证我们的预测。我们还检测当mi R-148a-3p过表达和下调时DNMT1在m RNA和蛋白水平的变化。应用MSP和q PCR实验研究H19和mi R-148a-3p和DNA甲基化的关系。结果在我们课题组前期研究中,我们发现H19在喉鳞癌中高表达。H19的表达水平和喉鳞癌患者的总生存率呈负相关。我们进一步研究发现下调H19抑制喉鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。mi R-148a-3p是H19的下游靶基因,受H19的调控。过表达mi R-148a-3p抑制喉鳞癌细胞的迁移、侵袭及增殖能力。相反的,下调mi R-148a-3p的表达量可以增强喉鳞癌细胞的迁移、侵袭及增殖。减少H19表达能减弱喉鳞癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,H19发挥作用依赖mi R-148a-3p。DNA甲基转移酶DNMT1是mi R-148a-3p的靶基因。下调H19、过表达mi R-148a-3p以及下调DNMT1均能抑制喉鳞癌细胞DNA甲基化。结论长链非编码RNA H19通过mi R-148a-3p和DNMT1在喉鳞癌中发挥促癌作用,DNA甲基化在该调控机制中扮演重要角色。
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