K—酪蛋白(以下简称K—CN)通常是牛乳腺分泌的一种含有少量磷酸基的磷蛋白。它是牛乳中酪蛋白的组成之一，是凝乳酶的天然底物。在自然状态下，K—CN是使牛奶保持稳定的乳浊液状态的重要因子。 本文以600头中国荷斯坦奶牛为研究材料，以K—CN基因为产奶性状的候选基因，采用DNA测序、PCR—RFLP和CRS—PCR技术，主要研究了K—CN基因外显子4、外显子5和内含子4区基因序列的单核苷酸多态性与中国荷斯坦牛泌乳性状的关联性，以及第四和五外显子不同单倍型组合对泌乳性状的影响，为未来培育高乳蛋白及高乳脂率奶牛提供参考依据。研究结果如下： 1.K—CN基因Exon4多态性与泌乳性状关联性分析 在exon4的第10891 bp、10927 bp、10988 bp和10996 bp处分别发生了T/C错义突变(导致136位异亮氨酸到苏氨酸的改变)、C/A错义突变(导致148位丙氨酸到天冬氨酸的改变)、G/A同义突变和T/A置换突变。据此分别选择了TaqI、HindIII、PstI、SspI4种限制性内切酶检测其多态性。4个位点的酶切多态性在所研究群体中是紧密连锁的；4个位点的A、B等位基因在群体中都有分布，且处于低度多态；A和B等位基因的频率分别为86.03％和13.97％； AA，AB和BB基因型频率分别为73.71％，24.63％和1.66％；X2适合性检验表明，该群体在这4个位点的突变达到Hardy—Weinberg平衡状态(P＞0.05)；BB和AB基因型个体乳脂率显著高于AA基因型个体(P＜0.05)，AB基因型个体脂蛋白比显著高于AA基因型个体(P＜0.05)，但不同基因型对产奶量和乳蛋白率没有显著影响。 2.K—CN基因Exon5多态性和第四、五外显子单倍型组合与泌乳性状关联性分析 在exon5上发现5个新的SNPs，包括A12907G、G12950A、C12989T、A13028G、T12980C，首次证实前4个位点紧密连锁。单位点基因型与泌乳性状的关联分析表明：T12980C突变位点的TC和CC基因型个体乳脂率、乳蛋白率分别极显著(P＜0.01)、显著高于TT基因型个体(P＜0.05)；紧密连锁的4个突变位点的DE基因型个体乳脂率极显著高于DD基因型个体(P＜0.01)。第四、五外显子9个多态位点单倍型组合分析表明：共构建出7种单倍型，发现了16种单倍型组合；其中H6H6单倍型组合个体乳脂率最高，H1H4次之；H1H4单倍型组合个体乳蛋白率最高；H5H6单倍型组合个体乳蛋白率及乳脂率最低。 3.K—CN基因Intron4多态性与泌乳性状关联性分析 通过测序发现在intron4基因序列存在3个新的SNPs，包括A12817G、G12218A、A12016G。与泌乳性状的相关性分析表明：A12817G3种基因型间AG个体乳脂率极显著高于AA个体(P＜0.01)；G12218A突变位点的3种基因型间GA个体乳脂率和乳蛋白率均显著高于AA个体(P＜0.05)； A12016G突变位点不同的基因型对泌乳性状均无显著性差异(P＞0.05)。