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断奶应激引起的仔猪肠道屏障损伤是造成仔猪生长缓慢、腹泻甚至死亡的重要原因。本文重点探讨了日粮添加果胶(Pectin,PEC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)应激断奶仔猪生产性能、肠道屏障功能及肠道糖基化修饰的影响,建立了研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化法。试验选取36头21日龄、胎次一致、体重接近(6.77±0.92)kg健康DLY断奶仔猪,采用2×2试验设计,即日粮(CON或PEC)和应激(LPS或生理盐水对照)处理。试验第14 d和第21 d,应激组仔猪腹腔注射LPS(80μg/kg.BW)。试验结束,每组选取8头仔猪,屠宰采样,测定其生产性能、肠道屏障功能和肠道糖基化修饰模式。结果如下:(1)日粮添加PEC有效改善LPS应激对仔猪生产性能的影响。LPS应激显著降低21 d(n=8/组)仔猪BW和ADG(P<0.05),显著影响仔猪F/G(P<0.05);日粮添加PEC显著提高14d(n=18/组)仔猪BW和1-14 d仔猪ADG(P<0.05),极显著改善1~14 d(n=18/组)仔猪F/G(P<0.01)。日粮添加PEC显著缓解LPS应激引起的21 d仔猪(n=8)BW、ADG和ADFI降低(P<0.05)。(2)日粮添加PEC有效改善LPS应激引起的仔猪肠道损伤,促进肠道健康(n=8/组)。LPS应激显著降低回肠的绒毛高度和绒隐比,下调回结肠MUC2和TFF3及回肠IL-10表达(P<0.05),显著上调回肠IL-1β、MCP-1和TLR4及结肠MCP-1和TLR4表达(P<0.05),显著升高血浆LPS含量和AKP活力(P<0.05);日粮添加PEC显著增加回肠绒毛高度和绒隐比,显著缓解LPS应激引起的回肠绒毛高度及绒隐比降低(P<0.05),上调回肠MUC2和TFF3表达,下调T LR4、MCP-1和IL-1β表达,上调回结肠IL-10表达,显著缓解LPS应激引起回肠IL-1β、MCP-1和TLR4及结肠MCP-1表达上调(P<0.05),降低血浆D乳酸和AKP含量(P<0.01),显著缓解LPS诱导的血浆D-乳酸、DAO和AKP含量提高(P<0.05)。(3)建立研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化法。以FITC-Lectin为探针,筛选出5种凝集素(UEA-1、ConA、DBA、PNA、WGA)的最佳封闭时间、组织通透最佳条件以及最佳使用量。最佳条件:切片脱蜡后,封闭切片30 min,采用5μg/mL FITC-Lectin室温孵育1 h,DAPI封片剂封片。方法具有灵敏度高、特异性好、定量多元特点。(4)日粮添加PEC改变糖基化修饰模式。LPS应激对仔猪回肠各种凝集素染色平均光密度(Average Optical Density,AOD)未见显著影响,日粮添加PEC有降低WGA的AOD趋势(P=0.08)。日粮添加PEC促进回肠O-糖基化核心(Core)结构改变,抑制LPS对O-糖基化Core1型和Core 2型结构糖基转移酶作用。LPS应激显著下调回肠糖基转移酶CIGALT1、CIGALT1C1、GCNT3、B3GALT5、FUT1、FUT2、ST3GAL1、ST6GALNAC1表达,上调GCNT1、B3GN T3、B3GNT6表达(P<0.05)。日粮添加PEC显著下调回肠C1GALT1、C1GALT1C1、GCNT1、B3GNT3、GCNT3、B3GALT5、FUT1、ST3GAL1、ST6GALNAC1、MGEA5表达,上调B3GN T6、FUT2表达(P<0.05)。日粮添加PEC显著缓解LPS应激引起回肠GCNT1、B3GNT3表达提高,下调GCNT3、B3GALT5、FUT1、ST6GALNAC1表达(P<0.05)。结论:LPS应激引起机体免疫功能下降、肠道损伤,影响生产性能。日粮添加PEC一定程度上缓解LPS应激引起的生产性能下降,系因PEC提高了仔猪对营养物质利用率,改善仔猪肠道黏液屏障功能。本试验成功建立研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化法,研究表明糖基化修饰模式存在肠道区域性。PEC促进回肠O-糖基化修饰模式向Core 3型糖链结构转变,并影响FUT2和OGA表达,表明PEC可通过诱导糖基化修饰模式,即核心糖链结构类型和末端糖基修饰的转变,缓解LPS应激对仔猪肠道的损伤。